维生素D在自身免疫性心肌炎中的研究
发布时间：2019-09-12 14:07
【摘要】：第一部分心肌炎及心衰小鼠心脏功能与血清维生素D水平的关系目的：用纯化的心肌肌球蛋白免疫诱导小鼠构建自身免疫性心肌炎及心衰模型,检测心肌炎及心衰模型动物心脏功能和血清维生素D水平,并分析二者之间的关系。方法：6-8周雄性BALB/c小鼠饲养在同济医学院无病原微生物(SPF)的实验动物中心,所有小鼠被随机分成4组,EAM组和其正常对照组A组：心衰模型组和其正常对照组B组。使用心脏α肌球蛋白重链多肽免疫小鼠,将多肽溶解在无菌PBS中,浓度为2mg/ml,充分溶解混匀后与等体积的完全弗氏佐剂充分乳化,EAM组小鼠在实验的第0天和第7天于腹股沟区进行皮下注射诱导心肌炎；心衰组分别在第0天、第7天和第30天各进行一次腹股沟区皮下注射免疫诱导,每只小鼠每次的注射剂量为200ug/200ul的多肽乳化液。各对照组在相应的时间点于腹股沟区皮下给予200ulPBS和完全弗氏佐剂乳化剂注射。在实验第21天,给EAM组和对照组A组小鼠行心脏超声心动图、心肌组织苏木精-伊红染色(HE染色)、心肌组织Masson染色和血清标本维生素D含量测定；心衰组和对照组B组小鼠在初次免疫后第12个月行心脏超声心动图检查、心肌组织苏木精-伊红染色(HE染色)、心肌组织Masson染色和血清标本维生素D含量测定。结果：与相应对照组相比,EAM组和心衰组小鼠心脏LVEF和LVFS均明显减低,心脏LVEDd、LVEDs明显增加,心脏重量和体重的比值明显增加(P0.01)。与对照组A组相比,EAM组小鼠心肌组织出现了明显的炎性细胞浸润和纤维化,正常心肌纤维被破坏,血清维生素D水平低于对照组A组(P0.05);与对照组B组相比,心衰组小鼠心腔明显增大,心室壁变薄,心脏出现明显纤维化改变,未见明显炎症细胞浸润,血清维生素D水平低于对照组B组(P0.05)。进一步用Spearman相关性分析发现,EAM组小鼠血清维生素D水平与心脏LVEF和LVFS呈正相关(r=0.75, P=0.020; r=0.75, P=0.020),与LVEDs呈负相关(r=-0.717,P=0.030)；心衰组小鼠血清维生素D水平与LVEF和LVFS也呈正相关(r=0.738, P=0.037; r=0.714, P=0.047),与LVEDd呈负相关(r=-0.810,P=0.015)。结论：用纯化的心肌肌球蛋白免疫小鼠可以成功构建自身免疫性心肌炎和心衰模型,心肌炎和心衰模型心脏功能与血清维生素D水平具有相关性。第二部分1,25-(OH)2D3在实验性自身免疫性心肌炎中的作用目的：研究维生素D活性衍生物1,25(OH)2 D3在自身免疫性心肌炎中的作用及其潜在的机制。方法：将6-8周的雄性BALB/c小鼠随机分成三组,正常对照组,EAM+溶剂对照组,EAM+1,25(OH)2 D3处理组。使用心脏α肌球蛋白重链多肽免疫小鼠,EAM+溶剂对照组和EAM+1,25(OH)2 D3处理组小鼠在实验的第0天和第7天于腹股沟区进行皮下注射,诱导心肌炎,对照组小鼠在相同的时间点给予200ul PBS和完全弗氏佐剂乳化剂在腹股沟区进行皮下注射。在首次免疫的当天开始给EAM+1,25(OH)2 D3处理组小鼠腹腔注射1,25(OH)2 D3,剂量为每只小鼠单次注射1,000 ng/kg体重,隔天注射一次直至实验结束(即从实验第0天开始到第21天结束)；EAM+溶剂对照组小鼠腹腔注射同等体积的95%乙醇和花生油的混合液,注射时间同EAM+1,25(OH)2 D3处理组。在实验第21天,将所有小鼠做心脏超声心动图检测评价心脏功能：心肌组织行苏木精-伊红染色(HE染色)观察组织细胞的形态结构；用TUNEL检测心脏组织心肌细胞凋亡情况；采用透射电子显微镜观察心肌组织超微结构；免疫组织化学染色检测caspase3蛋白的表达分布情况；免疫印迹分析(Western blot)检测自噬过程中重要蛋白的表达情况。结果：与溶剂处理的EAM组小鼠相比,1,25(OH)2 D3处理的EAM组小鼠心脏功能得到改善,心脏质量和体重比值减低。1,25(OH)2 D3处理减少了心肌组织炎症细胞浸润和心肌细胞凋亡。EAM小鼠心脏存在自噬异常,自噬小体形成增多,清除受阻,1,25(OH)2 D3处理能够恢复心脏自噬流,减少自噬小体的聚集。结论：1,25(OH)2 D3可以改善EAM小鼠心脏功能,减少心肌细胞凋亡,减轻EAM严重程度；1,25(OH)2 D3可能是通过调节自噬来发挥心脏保护功能的。
【图文】：
各组小鼠必肌组织行ＨＥ染色，２１天ＥＡＭ组小鼠必肌正常量炎症细胞浸润和必肌组织坏死，对照组Ａ、对照组Ｂ和Ｈ细胞浸润，，放大２００Ｘ，标尺＝１００ｕｍ逡逑也脏纤维化情况（图片３）逡逑初次免疫后的第２１天，对对照组Ａ组和ＥＡＭ组必脏组织行Ｍａ所示，对照组Ａ组只有血管周围有很少量的胶原沉积，与对模型小鼠也脏组织有胶原纤维沉积（染色呈蓝色）。在初次免组和必衰组也脏组织行Ｍａｓｓｏｎ染色，结果显示，对照组Ｂ组原纤维沉积，也衰组小鼠血管周围和必脏组织出现大量胶原纤，必室壁明显变薄。逡逑
（Ｆｎ－１）邋ｍＲＮＡ的表达情况。结果发现，ＥＡＭ组小鼠＇心肌组织中Ｃｏｌｌａｌ、Ｃｏｉｍ及逡逑Ｆｎ－１的表达已经出现了明显的升离（Ｐ邋＜０．０１），必衰组小鼠Ｃｏｌ邋Ｉ邋ａｌ、ＣｏＨＩＩ及Ｆｎ－１逡逑表达倍数X椉痈飨裕ǎ绣澹迹埃埃保ㄍ迹矗ｅ义希桢义稀鲥义
本文编号：2535182
【图文】：
各组小鼠必肌组织行ＨＥ染色，２１天ＥＡＭ组小鼠必肌正常量炎症细胞浸润和必肌组织坏死，对照组Ａ、对照组Ｂ和Ｈ细胞浸润，，放大２００Ｘ，标尺＝１００ｕｍ逡逑也脏纤维化情况（图片３）逡逑初次免疫后的第２１天，对对照组Ａ组和ＥＡＭ组必脏组织行Ｍａ所示，对照组Ａ组只有血管周围有很少量的胶原沉积，与对模型小鼠也脏组织有胶原纤维沉积（染色呈蓝色）。在初次免组和必衰组也脏组织行Ｍａｓｓｏｎ染色，结果显示，对照组Ｂ组原纤维沉积，也衰组小鼠血管周围和必脏组织出现大量胶原纤，必室壁明显变薄。逡逑
（Ｆｎ－１）邋ｍＲＮＡ的表达情况。结果发现，ＥＡＭ组小鼠＇心肌组织中Ｃｏｌｌａｌ、Ｃｏｉｍ及逡逑Ｆｎ－１的表达已经出现了明显的升离（Ｐ邋＜０．０１），必衰组小鼠Ｃｏｌ邋Ｉ邋ａｌ、ＣｏＨＩＩ及Ｆｎ－１逡逑表达倍数X椉痈飨裕ǎ绣澹迹埃埃保ㄍ迹矗ｅ义希桢义稀鲥义
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