ABCG1启动子多态性对转录活性的影响及其与冠心病的相关性

发布时间：2019-10-08 06:13

【摘要】：【研究背景】冠心病(coronary artery disease,CAD)是危害人类健康的主要疾病,其发病率和死亡率居所有疾病之首。CAD的发生主要是由于冠状动脉粥样硬化所致,受遗传因素和环境因素影响,其中遗传因素起主导作用。高胆固醇是CAD的独立危险因素之一,其在细胞中的蓄积与胆固醇的细胞代谢调控有关。三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)是三磷酸结合盒(ATP-binding cassette,ABC)转运体超家族中的成员之一,参与细胞内胆固醇和磷脂向高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)转运的过程,从而避免胆固醇严重沉积于外周细胞,在胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT)中起重要作用。既往研究显示ABCG1基因内或启动子区的单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms,SNPs)与CAD的易感性有关。启动子区的SNPs能导致ABCG1的表达水平改变,从而导致个体对CAD易感性的差异,致使启动子活性下降的SNPs降低CAD的发病风险,其主要机制可能是诱导巨噬细胞的凋亡所致。然而ABCG1存在多个转录调控区(promoter region A,B,C等),对于启动子A中的SNPs是否与CAD的易感性有关也有研究报道,且与早发心肌梗死和冠脉病变血管数相关。但rs1378577是否影响ABCG1启动子活性,以及在启动子A区是否存在其它与CAD易感性有关的SNPs尚不清楚,本研究拟通过Sanger测序和双萤光素酶报告基因系统鉴定ABCG1启动子A区与CAD易感性相关的SNPs和单倍型,进一步揭示ABCG1参与CAD发生发展的分子遗传机制。【研究目的】1.探讨ABCG1基因启动子A近转录启始位点区域的多态性对基因转录活性的影响。2.探讨ABCG1启动子A近转录启始位点区域的多态性与中国南方汉族人群CAD易感性的关系。【研究方法】1.采用病例-对照研究,收集217例经冠脉造影证实的CAD患者和142例对照者的血样,提取基因组DNA;同时收集研究对象的详细临床资料。2.对ABCG1启动子A转录启始位点上游约1000 bp核苷酸序列进行PCR扩增和Sanger法测序,计算SNPs位点基因型和等位基因型在各组中的频率,并对序列进行进化分析,分析SNPs组成的单倍型及单倍型频率分布。3.构建ABCG1的组成型和突变型启动子单倍型萤光素酶报告基因载体,转染Hela和HCAEC,利用双萤光素酶报告基因系统检测不同单倍型的萤光素酶活性。4.统计分析:比较分析组或亚组间SNPs等位基因频率、基因型频率及其所形成的单倍型频率差异。【结果】1.在ABCG1基因启动子A转录启始位点上游约1000 bp序列中发现3个多态性位点[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)],可形成ACG、GAT和GCG 3种单倍型,3个SNPs间强连锁不平衡,Tajima’s D=2.655(P0.001)。2.三种组成型单倍型(ACG、GAT和GCG)的转录活性无显著性差异。将GAT进行点突变,得到两种突变单倍型GAG和GCT,GAG单倍型的转录活性较组成型单倍型的转录活性升高约2倍,而GCT单倍型的转录活性与组成型单倍型无显著差异。3.ABCG1启动子A区SNP位点[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)]的等位基因频率、基因型频率及其形成的单倍型的频率在CAD和对照组中分布无统计学差异,与早发CAD及CAD病变数量的严重程度亦无显著相关性。【结论】1.ABCG1启动子A区的3个SNPs[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)]形成的三种组成型单倍型的启动子活性没有显著差异。2.ABCG1启动子A区的3个SNPs[-384(A/G)、-204(A/C)和-134(T/G)]的等位基因频率、基因型频率及其形成的组成型单倍型的频率分布与CAD的易感性无显著性相关。
【图文】：

示意图,单倍型,示意图,产物

DNA（GAT 单倍型质粒） 1.6 μL生成产物 D（2）第二轮 PCR反应体系①总体系 50 μLddH2O 22.4 μLrime STAR Max DNA Polymerase（2×） 25 μL正向引物 a（10 μmol/L） 0.5 μL反向引物 b（10 μmol/L） 0.5 μL产物 A、B 1.6 μL生成最终产物突变单倍型 GAG，示意图见图 1。

示意图,单倍型,示意图,硕士学位论文

广州医科大学硕士学位论文反应体系②总体系 50 μLddH2O 22.4 μLPrime STAR Max DNA Polymerase（2×） 25 μL正向引物 Kpn I-ABCG1（10 μmol/L） 0.5 μL反向引物 Hind Ⅲ-ABCG1（10 μmol/L） 0.5 μL产物 C、D 1.6 μL生成最终产物突变单倍型 GCT，见示意图 2。
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R541.4

【参考文献】