miR-211过表达改善骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的疗效

发布时间：2019-10-11 18:43

【摘要】：背景：骨髓间充质干细胞(MSCs)移植修复梗死心肌已经成为研究的热点。MSCs迁移到损伤心肌区域是修复组织至关重要的一步,但很多研究均表明经血管移植时,迁移到受损区域的MSCs极少。因此,研究调控MSCs迁移的相关机制至关重要。我们前期研究证实,缺氧预处理能提高MSCs的迁移能力,同时缺氧预处理也能上调miR-211的表达。根据相关文献报道,miR-211能调控多种肿瘤细胞的迁移。因此,我们推测miR-211在MSCs迁移过程中起重要作用。本课题的目的就是研究miR-211对MSCs迁移能力的调控作用及具体机制。 方法和结果：体外的Transwell迁移实验提示,miR-211过表达能提高MSCs的迁移能力,而下调miR-211的表达能降低MSCs的迁移能力。miR-211过表达或表达下调的雄性MSCs经尾静脉移植到雌性大鼠急性心梗模型中,2天后检测GFP表达和SRY基因来定性和定量MSCs迁移到梗死周边区的能力。实验结果提示miR-211过表达能增加MSCs迁移梗死周边区的细胞数量。心梗28天后,与PBS及MSCs对照组相比,miR-211过表达的MSCs组大鼠心功能改善,疤痕面积缩小。Targetscan等生物信息学软件预测STAT5A可能是miR-211的靶基因,双荧光素酶报告基因系统、RT-PCR和蛋白电泳,证实miR-211能结合至STAT5A的3’-UTR区,调控STAT5A的转录。体内和体外功能学实验提示,上调STAT5A能抑制MSCs的迁移能力,下调STAT5A能提高MSCs的迁移能力。miR-211过表达诱导的迁移能力增加,能被STAT5A抑制。根据文献报道,STAT3在MSCs的迁移中起到及其重要的作用,且缺氧预处理也能调控STAT3的活性。我们预测STAT3与miR-211可能有相互作用。染色质免疫共沉淀和荧光素酶报告基因实验验证STAT3可以直接结合到miR-211的启动子区域并能调控miR-211的表达。 结论：STAT3/miR-211/STAT5A信号通路在MSCs的迁移过程中起到关键作用。经静脉移植miR-211过表达的MSCs改善心梗后心功能。
【图文】：

MSCs迁移能力（100.6±9.70细胞数/每个视野，PO.Ol.图。同时我们发现miR-211过表达显著提高了 MSCs迁移能力（胞数/每个视野，PO.Ol.图2A&B )。这表明miR-211在MSC其重要的调节作用。

图6 STAT5A负调控MSCs的迁移能力。A我们设计了三段特异性与STAT5A结合的ShRNA序列，下调STAT5A的表达效果都还可以，我们选择了效果最好的shRNA30 B MSCs感染过STAT5A过表达病毒72小时后，western blot验证STAT5A的蛋白水平明显升高。C MSCs感染过STAT5A-over及STAT5A-shRNA后，我们用Transwell迁移实验验证细胞的功能改变。D统计发现STAT5A表达下调后MSCs迁移到下室的数量有明显增加，而STAT5A过表达后MSCs的迁移能力则显著减弱，每组n=3,标尺为200^im。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R542.22

【共引文献】

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本文编号：2547618