miR-155在TNF-α诱导的HUVECs凋亡中的作用及其机制研究

发布时间：2019-12-04 14:24

【摘要】：目的:观察mi R-155在TNF-α诱导的HUVECs中的表达情况,明确mi R-155对TNF-α促HUVEC凋亡的调控作用,探讨其靶点及作用机制。方法:(1)首先根据TNF-α处理浓度的不同分为以下六个浓度组,即0 ng/mL组、1 ng/mL组、10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组和100 ng/mL组;再将各浓度组分别分成以下四个不同时间处理组,即0 h组、12 h组、24 h组和48 h组。采用MTT法检测各组细胞存活率、Heochst33342染色法检测各组细胞的凋亡情况,由此确定TNF-α诱导HUVECs凋亡模型的最佳处理浓度和处理时间;(2)qPCR法检测TNF-α诱导HUVECs凋亡模型中mi R-155的表达情况;(3)转染miR-155 mimics使mi R-155过表达,转染anti-miR-155沉默mi R-155表达,设立空白对照组、阴性对照组、TNF-α组、miR-155mimics组、anti-miR-155组,qPCR法检测各组miR-155表达情况,MTT法检测各组细胞存活率;Heochst33342和Annexin V-FITC/PI双染法分别检测各组HUVECs凋亡情况;(4)生物信息学软件预测mi R-155靶基因(5)Western blot法检测各组FADD、Caspase-3及Active-caspase-3蛋白表达水平。结果:(1)HUVECs的存活率随着TNF-α处理时间的延长和处理浓度的增加而降低,HUVECs的凋亡率随TNF-α处理时间的延长和处理浓度的增加而升高,并确定TNF-α诱导HUVECs凋亡模型的最佳处理条件为10 ng/ml TNF-α处理24 h。(2)qPCR结果表明,10 ng/ml TNF-α处理HUVECs 24 h后,miR-155的表达明显升高(P0.01)。(3)qPCR结果表明,miR-155 mimics上调HUVECs中miR-155表达水平(P0.01),anti-mi R-155抑制HUVECs中mi R-155表达(P0.01);与TNF-α组相比,miR-155 mimics组HUVECs存活率明显提高(P0.01)、凋亡率显著降低(P0.01),anti-miR-155组HUVECs生存率明显降低(P0.01)、凋亡率显著增高(P0.01)。(4)生物信息学软件预测出FADD、Caspase-3可能是mi R-155的靶基因。(5)Western blot检测结果显示,与TNF-α组相比,miR-155 mimics组FADD、Caspase-3及Active-caspase-3蛋白表达明显下调(P0.01),anti-miR-155组表FADD、Caspase-3及Active-caspase-3蛋白表达明显上调(P0.01)。结论:mi R-155可能通过下调FADD、Caspase-3蛋白表达抑制TNF-α诱导的HUVECs凋亡。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5

【参考文献】

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本文编号：2569647