西地那非对人淋巴管畸形内皮细胞增殖影响的体外研究

发布时间：2019-12-04 23:33

【摘要】：研究背景淋巴管畸形(Lymphatic Malformation,LM)是一种先天性的淋巴系统发育畸形疾病,常导致外貌畸形和功能障碍,甚至危及生命。LM虽为良性病变,但由于病灶常侵入周围组织或器官,边界不清,故治疗较为困难。2012年,新英格兰杂志报道,口服西地那非对一例淋巴管畸形患儿的治疗有效,随后,西地那非成为淋巴管畸形治疗中的研究热点,该药物的应用为LM的治疗提供了新的选择,但相关的作用机制未见报道。在病理结构上,淋巴管畸形内皮细胞(Lymphatic Malformation Endotheljal ccells,LMECs)是 LM 病灶的主要组成细胞,有研究表明,淋巴管畸形中的LMECs存在异常增殖,常伴有血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)和血管内皮生长因子受体3(Vascular endothel ial growth factor receptor-3,VEGFR-3)的表达增加,在LM的发展中具有重要的作用。研究目的通过观察西地那非对体外培养的人淋巴管畸形内皮细胞HLMECs增殖的影响,检测VEGF-C和VEGFR-3表达量的改变,在细胞水平探究西地那非治疗淋巴管畸形的潜能及可能机制,为西地那非用于LM的临床治疗提供实验依据。研究方法选取山东大学齐鲁医院口腔颌面外科行舌淋巴管畸形切除,并得到手术后病理证实的组织标本,采用组织块培养法对人淋巴管畸形内皮细胞进行体外培养;免疫细胞化学染色CD-31及淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)进行细胞鉴定;以不同浓度的西地那非(1、2、5、10 μmol/L)作用于HLMECs后,用倒置显微镜观察HLMECs形态的变化,MTT比色法和EdU染色法检测对细胞增殖的影响,Western Blot检测血管内皮生长因子C(VEGFC)及其受体VEGFR-3表达的变化。使用SPSS 21.0软件包,采用独立样本t检验和单因素方差分析加LSD法进行统计学分析。研究结果组织块培养72 h后开始有细胞爬出,细胞呈多角形,单层贴壁生长,如鹅卵石状,生长速度较缓慢。细胞传代后,细胞变为长梭形,形态不规则,增殖速度加快;免疫细胞化学染色法显示淋巴管内皮透明质酸受体LYVE-1和内皮细胞标记物CD31均呈阳性表达,证实所获细胞为该淋巴管畸形内皮细胞;西地那非作用后,随着药物浓度的上升,细胞密度逐渐下降,细胞增殖速度减慢,2 μmol/L细胞组即出现肉眼可观测的密度下降,在10μmol/L时,细胞质出现颗粒状改变,胞膜变得不完整,细胞贴壁能力差,且细胞膨大,形态不规则;EdU染色显示了细胞增值率随着西地那非浓度的升高逐渐降低,浓度2 μmol/L组开始出现细胞增殖率下降(P0.05),MTT结果与以上吻合,且显示相同浓度药物处理时,刺激时间延长,细胞增殖抑制率增加(P0.05),说明西地那非对淋巴管畸形内皮细胞的增殖抑制作用兼具浓度依赖性及时间依赖性;Western Blot显示VEGF-C自西地那非5 μmol/L剂量组出现表达降低(P0.05),而VEGFR-3则在1 μmol/L出现下调(P0.05),各实验组均有统计学差异。结论西地那非对体外培养的HLMECs有增殖抑制作用,使HLMECs中VEGF-C和VEGFR-3的表达降低,这可能是其治疗LM的作用机制之一。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R551.2

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 刘欣,石应康,祝彼得;培养内皮细胞的分化[J];生物医学工程学杂志;1999年02期

2 卫朝霞,刘永波;一种新的内皮细胞分离方法[J];河南职工医学院学报;2003年03期

3 任德成;胡娟娟;张均田;杜冠华;;血管内皮细胞损伤机制研究[J];医学研究通讯;2003年10期

4 潘虹;王庭槐;;内皮细胞caveolae,caveolin-1的生理功能[J];医学综述;2006年22期

5 殷观梅;;血管内皮细胞生长抑制因子研究进展[J];河北医药;2008年12期

6 刘宝宜,陈铁镇,张宝庚,宋继业;动脉粥样硬化形成过程中内皮细胞病变的研究(摘要)——主动脉内皮细胞平掙,扫描电镜及透射电镜的观察[J];中国医科大学学报;1981年S1期

7 刘宝宜,陈铁镇,张宝庚,宋继业;动脉粥样硬化形成过程中内皮细胞的形态学变化的研究(主动脉内皮细胞平铺技术,扫描电镜及透射电镜的方法)[J];中国医科大学学报;1982年03期

8 张连元;;动脉粥样硬化发病机理中平滑肌和内皮细胞的机能[J];煤矿医学;1983年04期

9 刘怀琼;李德馨;;内皮细胞的功能与休克的关系[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;1985年04期

10 何泽涌;;关于内皮细胞研究的某些进展[J];山西医药杂志;1987年03期

相关会议论文 前10条

1 应大君;陈卫军;周丁华;;内皮细胞机械感受功能的实验研究[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

2 邓红;李懿萍;来茂德;;高糖环境细胞间相互作用对内皮细胞产生活性氧和血管内皮细胞生长因子的影响[A];中华医学会病理学分会2005年学术年会论文汇编[C];2005年

3 林萍章;PualJ.Pearson;RaymondCartier;KazuhiroHashimoto;HartzellV.Schaff;;内膜再生过程中,内皮细胞之反应[A];海峡两岸电子显微学讨论会论文专集[C];1991年

4 赵彭涛;李志超;董明清;贾斌;张莉莉;;LPS对培养的BPAECsⅠ型Na~+/H~+交换器活性的影响[A];第六次全国缺氧和呼吸病理生理学术会议论文摘要汇编[C];2003年

5 熊建琼;朱佩芳;王正国;蒋建新;;髓样分化蛋白-2在内毒素与内皮细胞结合中的作用[A];第十一次全国急诊医学学术会议暨中华医学会急诊医学分会成立二十周年庆典论文汇编[C];2006年

6 王心华;甄永苏;;烯二炔类抗生素力达霉素抑制内皮细胞生长和诱导内皮细胞凋亡[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

7 李彦荣;应晨江;易海维;衣卫杰;孟依;刘烈刚;孙秀发;;绿茶多酚对牛内皮细胞窖蛋白-1表达的影响[A];湖北省、武汉市营养学会第十一届学术会议论文汇编[C];2007年

8 蔡绍皙;张莉;韩亚刚;蒋稼欢;;流动腔底面内皮细胞图型化研究与图像处理[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

9 汪毅;陈允钦;;高密度脂蛋白与内皮功能[A];第六次全国中西医结合心血管会学术会议论文汇编[C];2002年

10 马向红;黄体钢;杨万松;周丽娟;;四氢生物喋呤对内皮细胞产生一氧化氮和超氧阴离子的影响[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

相关重要报纸文章 前6条

1 ;中药抗血栓机理及对内皮细胞的生物医学研究取得佳绩[N];科技日报;2000年

2 赵军;耳毒性药物对耳蜗螺旋动脉平滑肌和内皮细胞电生理特性的影响项目[N];科技日报;2007年

3 华朋;热爱老年事业 投身老年医药[N];中国老年报;2000年

4 高国起;提升ACE2活性可消退动脉硬化斑块[N];中国医药报;2010年

5 佳愉;中药善调理 降压重保肾[N];中国中医药报;2009年

6 刘道安;保护动脉内膜 减少冠心病发生[N];中国医药报;2005年

相关博士学位论文 前10条

1 白云城;LPS调控静脉内皮细胞膜形态及通透性引发血栓形成的实验研究[D];昆明医科大学;2015年

2 宋恩;内皮细胞源性KLF15调控TM激活蛋白C抗凝血途径及MCP-1介导炎性反应影响DVT形成的实验研究[D];昆明医科大学;2015年

3 宋凯;口腔癌—内皮细胞融合的分子调控机制及潜在作用[D];武汉大学;2014年

4 薛珊珊;用代谢组学方法研究DNA甲基化对花生四烯酸代谢的影响及血管内皮激活的机制[D];天津医科大学;2015年

5 李强;Rho GTPases及其信号通路在1-磷酸鞘胺醇介导的内皮细胞功能变化中的作用[D];南方医科大学;2013年

6 陈学军;SUR2B/Kir6.1通道开放剂介导内皮细胞保护效应分子途径的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2016年

7 王苏阳;埃他卡林对体循环、脑循环、肺循环微动脉内皮细胞SUR2B/Kir6.1通道的激活作用及能量代谢物质的调节作用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2016年

8 苑t，

本文编号：2569809