雷米普利对心力衰竭大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关因子的影响

发布时间：2019-12-05 01:10

【摘要】：心力衰竭作为一类严重的临床病征,其表现为心泵功能衰退的同时,还常常伴随肝、肾、肺等其他靶器官的损伤。心力衰竭时心脏射血分数降低,肾脏血流量减少,肾小球的滤过率随之降低,致使肾脏血流二次分布,最终使肾功能遭到严重损害。肾功能损伤可反作用于心脏,使其衰竭症状进一步加重,影响治疗效果,导致病死率升高。可见,二者相互作用,彼此影响,构成恶性循环,进一步加速心衰的进展。雷米普利(Ramipril,RAM)作为一种高效的血管紧张素转换酶抑制剂(Angiotensin-Converting Enzyme Inhibitors,ACEI),是治疗心力衰竭的一线用药,但对于其在肾脏保护方面的具体机制仍众说纷纭,该研究通过检测心衰大鼠肾脏组织细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3及细胞色素C(CytochromeC,Cyt-C)的表达水平,探讨雷米普利可能对心力衰竭大鼠肾脏组织细胞凋亡所产生的影响。目的:应用肾上腹主动脉缩窄法建造心衰大鼠相关模型。雷米普利干预成功后的模型,采用苏木素-伊红(HE)染色方法查看大鼠的肾脏形态学结构,TUNEL技术分析肾脏组织凋亡情况,免疫组织染色法(SP)和蛋白免疫印迹法测定Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cytochrome C蛋白于大鼠肾脏组织内的表达趋势,RT-PCR法对Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cytochrome C的mRNA在大鼠肾脏组织内的表达水平进行测定,通过观察雷米普利对心衰大鼠肾脏细胞凋亡及相关凋亡因子的影响,探讨该药对心衰大鼠肾脏组织的可能保护机制。方法:1取雄性的清洁Wistar大鼠40只,任意选取其中10只大鼠纳入假手术组,其他大鼠均行腹主动脉缩窄操作术。以左心室舒张末压(LVEDP)≥15mmHg为模型构建成功的标准。同时对假手术组大鼠只游离腹主动脉并不结扎。取造模成功的20只大鼠随机分至模型对照组及雷米普利组。2每组大鼠均抵达观察终点时,相应大鼠的lvedp使用多导电生理记测仪监测并精细完整的记录数据。取出大鼠肾脏,进行称量。3he染色法观察每组实验标本的肾脏细胞形态学变化。4tunel技术描述肾脏的组织凋亡概况,统计组织凋亡率(ai)。5sp和westernblot技术分析大鼠肾脏标本内bcl-2、bax、caspase-3及cyt-c蛋白的表达情况。6rt-pcr技术测定相关大鼠肾脏组织细胞中bcl-2、bax、caspase-3及cyt-c的mrna表达水平。结果:1lvedp结果假手术组、模型对照组以及雷米普利组大鼠的lvedp分别为:(5.52±0.95)mmhg、(19.48±1.68)mmhg和(12.16±1.46)mmhg。模型对照组及雷米普利组大鼠的lvedp与假手术组相比较均有所上升(p0.01);同模型对照组比较,雷米普利组大鼠的lvedp明显下降(p0.01)。2he染色观察实验对象肾脏组织的病理形态学改变假手术组大鼠肾脏细胞外象正常,分布规整、紧致,结构明朗;模型对照组肾小管结构较混乱,上皮细胞分布散乱、模糊,管腔扩大;雷米普利组肾小管结构亦出现少许混乱,上皮细胞分布稀疏、模糊,但未见管腔扩张。3每组大鼠的肾脏细胞凋亡指数(ai)结果显示假手术组、模型对照组、雷米普利组大鼠的ai结果分别是(2.51±0.97)%、(40.79±1.31)%和(19.89±1.24)%。模型对照组及雷米普利组大鼠与假手术组大鼠的ai比较均有所增高(p0.01),与模型对照组比较,雷米普利组ai明显降低(p0.01)。4免疫组织化学染色法分析每实验组对象肾脏组织中bcl-2及bax蛋白的表达情况bcl-2蛋白在每组大鼠肾脏细胞中的表达趋势为:假手术组明显表达:镜下显示胞内含有较多暗棕黄色物质,模型对照组少量表达,雷米普利组则可见中等程度表达,表达量明显少于假手术组,同时高于模型对照组。bax蛋白表达结果则显示:假手术组大鼠肾脏细胞内无明显暗棕色物质;模型对照组大鼠相关细胞内则有明显暗棕色物质表达,雷米普利组可见中等量暗棕色物质表达。5蛋白免疫印迹法测定每组大鼠肾脏组织中Caspase-3及Cyt-C蛋白的表达情况与假手术组比较,后两组Caspase-3及Cyt-C蛋白的显现水平均显著增高(P0.01),与模型对照组相比,雷米普利组Caspase-3及Cyt-C蛋白的显现则显著降低(P0.01)。6 RT-PCR法估测每组实验大鼠中Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA在肾脏组织内的表达水平同假手术组相比,模型对照组大鼠中Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA表达均有不同程度提升(P0.01),Bcl-2的mRNA表达则有所下降(P0.01);雷米普利组大鼠中Bax、Caspase-3及Cyt-C的mRNA表达较模型对照组显著降低(P0.01),Bcl-2的mRNA表达则显著增高。结论:1心力衰竭大鼠肾脏的损伤同细胞凋亡的发生联系密切。2雷米普利能够有效抑制心力衰竭大鼠肾组织细胞凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax、Caspase-3及Cyt-C的表达,进而阻断线粒体途径有关。
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R541.6

【参考文献】