辛伐他汀抑制oxLDL诱导的巨噬细胞焦亡

发布时间：2020-02-20 09:13

【摘要】：目的探讨辛伐他汀在氧化低密度脂蛋白(ox LDL)诱导巨噬细胞焦亡中的作用及机制。方法 ox LDL作用于J774A.1小鼠巨噬细胞,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放试剂盒检测LDH的释放,荧光显微镜观察吖啶橙(AO)、溴化乙锭(EB)的染色情况来判断焦亡细胞膜的完整性;Western blot检测LC3-Ⅱ/Ⅰ、caspase-1与白介素-1β(IL-1β)的蛋白表达情况;分别加入辛伐他汀、3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬阻断剂等药物后,检测上述实验结果的变化情况。结果在ox LDL诱导的巨噬细胞脂质聚集的过程中,辛伐他汀药物有保护膜完整性的作用,并且显著减少LDH的释放,AO/EB荧光染色结果可观察到橘红色荧光(EB)所占比例显著降低,并抑制caspase-1的激活和IL-1β的分泌。然而,当巨噬细胞的自噬过程被3-MA所阻断时,Western blot结果显示LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达下调,caspase-1的活性和成熟的IL-1β分泌增加;同时LDH实验和染色实验结果也显示,LDH释放增多、AO/EB染色中橘红色荧光增加,表明ox LDL诱导的巨噬细胞膜的损伤进一步加重。结论辛伐他汀可抑制ox LDL诱导的巨噬细胞焦亡,可能与增强ox LDL诱导的巨噬细胞自噬有关。
【图文】：

。2．1．2AO/EB染色结果在应用oxLDL后，EB橘红色荧光显著上升;与正常细胞组相比，加入不同浓度辛伐他汀(0.5、1.0μmol/L)后，EB的荧光无明显变化;而在oxLDL的基础上加入辛伐他汀后，EB橘红色荧光所占的比例呈减少的趋势。见图1B。2．23-MA阻断辛伐他汀对oxLDL介导的巨噬细胞自噬的增强作用在ox-LDL及1.0μmol/L辛伐他汀处理的J774A.1细胞中，在3-MA的作用下，LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达明显下降至(0.32±4.65)%，差异有统计学意义(F=224.05，P＜0.01)。见图2。2．33-MA阻断自噬对辛伐他汀抑制oxLDL诱导的巨噬细胞焦亡影响图1LDH的释放和AO/EB复染情况A:LDH的释放;B:AO/EB复染×400;1:对照组;2:oxLDL;3:0．5μmol/L辛伐他汀;4:1．0μmol/L辛伐他汀;5:oxLDL+0．5μmol/L辛伐他汀;6:oxLDL+1．0μmol/L辛伐他汀;与oxLDL比较:#P＜0.05图23-MA作用巨噬细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达1:oxLDL;2:oxLDL+辛伐他汀;3:oxLDL+辛伐他汀+3-MA;与oxLDL+辛伐他汀比较:##P＜0.012．3．13-MA作用后LDH释放检测结果正常细安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Nov;52(11)·1655·

少的趋势。见图1B。2．23-MA阻断辛伐他汀对oxLDL介导的巨噬细胞自噬的增强作用在ox-LDL及1.0μmol/L辛伐他汀处理的J774A.1细胞中，在3-MA的作用下，LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达明显下降至(0.32±4.65)%，差异有统计学意义(F=224.05，，P＜0.01)。见图2。2．33-MA阻断自噬对辛伐他汀抑制oxLDL诱导的巨噬细胞焦亡影响图1LDH的释放和AO/EB复染情况A:LDH的释放;B:AO/EB复染×400;1:对照组;2:oxLDL;3:0．5μmol/L辛伐他汀;4:1．0μmol/L辛伐他汀;5:oxLDL+0．5μmol/L辛伐他汀;6:oxLDL+1．0μmol/L辛伐他汀;与oxLDL比较:#P＜0.05图23-MA作用巨噬细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达1:oxLDL;2:oxLDL+辛伐他汀;3:oxLDL+辛伐他汀+3-MA;与oxLDL+辛伐他汀比较:##P＜0.012．3．13-MA作用后LDH释放检测结果正常细安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Nov;52(11)·1655·

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