同型半胱氨酸诱导miR-33经PPARα-LXRα途径抑制胆固醇逆转运的机制研究

发布时间：2020-04-12 19:33

【摘要】：目的:研究同型半胱氨酸(HCY)诱导miR-33是否通过氧化物酶增殖物激活受体α(PPARα)-肝脏X核受体α(LXRα)途径抑制胆固醇逆转运(RCT),促进脂质聚集,导致动脉粥样硬化(AS)。方法:实验一:(1)RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导成为泡沫细胞,油红“O”染色鉴定泡沫细胞是否诱导成功。(2)再给予不同浓度梯度(空白对照组、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、5.0 mmol/L)同型半胱氨酸(HCY)干预。(3)油红“O”染色观察细胞内脂滴情况。(4)蛋白免疫印迹(Western blot)和实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)及过氧化物酶增殖物激活受体α(PPARα)、肝脏X核受体α(LXRα)的蛋白和mRNA表达水平。(5)高效液态相谱检测胞内胆固醇酯含量。(6)液体闪烁计数法分析胞内胆固醇流出率。实验二:(1)RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导成为泡沫细胞模型,油红“O”染色确定模型是否诱导成功。(2)用lipofectamin 2000?将miR-33 mimics、miR-33 inhibitor转染入细胞内,再选取实验一抑制胆固醇逆转运最佳HCY浓度(5.0 mmol/L)干预24 h进行实验。(3)油红“O”染色观察细胞内脂滴情况。(4)蛋白免疫印迹(Western blot)和实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)及过氧化物酶增殖物激活受体α(PPARα)、肝脏X核受体α(LXRα)蛋白和mRNA表达水平。(5)实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-33 mRNA表达含量。(6)高效液态相谱检测胞内胆固醇酯含量。(7)液体闪烁计数法分析胞内胆固醇流出率。结果:结果一:(1)与空白对照组相比较,HCY干预组ABCA1、ABCG1及PPARα、LXRα的蛋白和mRNA的表达量均降低,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内的胆固醇含量均增高,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内胆固醇流出率降低,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)随HCY浓度增加,组间相比较,结果是浓度越高,ABCA1、ABCG1及PPARα、LXRα的蛋白和mRNA表达量越低,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内的胆固醇含量越高,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内胆固醇流出率越低,差异具有统计学意义(P0.05)。结果二:(1)随HCY浓度增加,组间相比较,结果是浓度越高,miR-33 mRNA表达含量越高,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)与对照组相比,miR-33 mimics组ABCA1、ABCG1及PPARα、LXRα蛋白和mRNA的表达量均降低,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内胆固醇含量逐渐增加,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内胆固醇流出率逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)与对照组相比,miR-33 inhibitor组ABCA1、ABCG1及PPARα、LXRα蛋白和mRNA的表达量均升高,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内胆固醇含量逐渐降低,差异具有统计学意义(P0.05);细胞内胆固醇流出率逐渐增加,差异具有统计学意义(P0.05)。(4)空白对照组、miR-33 mimics NC组和miR-33 inhibitor NC组3组间相比较,所有检测指标均无统计学差异(P0.05)。结论:1.同型半胱氨酸(HCY)通过抑制ABCA1和ABCG1蛋白及mRNA表达,降低胆固醇逆转运(RCT)效率,促进脂质聚集,导致动脉粥样硬化(AS)。2.同型半胱氨酸(HCY)通过抑制PPARα-LXRα通路下调ABCA1和ABCG1蛋白及mRNA表达,降低胆固醇逆转运(RCT)效率,促进脂质聚集。3.同型半胱氨酸(HCY)可以诱导miR-33含量增加,提示两者具有相关性。4.同型半胱氨酸(HCY)通过诱导miR-33抑制ABCA1和ABCG1蛋白及mRNA表达,降低胆固醇逆转运(RCT)效率,促进脂质聚集,导致动脉粥样硬化(AS)。5.同型半胱氨酸(HCY)通过诱导miR-33抑制PPARα-LXRα途径下调ABCA1和ABCG1蛋白及mRNA表达,降低胆固醇逆转运(RCT)效率,促进脂质聚集,导致动脉粥样硬化(AS)。
【图文】：

油红“O”染色观察细胞内脂滴含量（X20）

Westernblot与RT-qPCR检测PPARα和LXRα蛋白及mRNA表达
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R543.5

【相似文献】

相关硕士学位论文 前1条

1 代佩;同型半胱氨酸诱导miR-33经PPARα-LXRα途径抑制胆固醇逆转运的机制研究[D];山西医科大学;2019年

，

本文编号：2625100