α7-nAChR抑制尼古丁诱导巨噬细胞和主动脉平滑肌细胞MMP-9，MMP-2，MCP-1和RANTES表达的研究

发布时间：2020-04-14 22:30

【摘要】：[背景]炎症浸润和基质降解是腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)两大重要的病理机制。巨噬细胞和主动脉平滑肌细胞是参与AAA形成最重要的细胞,可以通过分泌基质金属蛋白(matrix metalloproteinases,MMPs)和炎性因子,诱导AAA的发生发展。吸烟是引起AAA重要并可控的因素。由alpha7烟碱乙酰胆碱能受体(alpha7 nicotine acetylcholine receptor,α7-nAChR)和传出迷走神经、神经递质乙酰胆碱组成的胆碱能抗炎通路可抑制炎症反应,治疗炎症性疾病。[目的]本研究目的是明确α7-nAChR(采用选择性激动剂PNU-282987)是否影响尼古丁诱导巨噬细胞(RAW264.7细胞)和主动脉平滑肌细胞(MOVAS细胞)MMPs和炎性因子的分泌及研究其潜在可能的分子机制。[方法和结果]首先,给予RAW264.7和MOVAS细胞10 ng/ml的尼古丁刺激0,10,20,30,60和120 min。其次,给予0,1,10,100ng/ml尼古丁刺激RAW264.7和MOVAS细胞30 min。结果显示,尼古丁诱导RAW264.7细胞ERK1/2和c-Jun的磷酸化蛋白的表达。MEK1/2高度选择性抑制剂U0126抑制尼古丁诱导ERK1/2磷酸化蛋白的高表达,进而下调了尼古丁诱导c-Jun的磷酸化及MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES蛋白和mRNA的高表达。同样的,尼古丁可以显著提高了MOVAS细胞的c-Jun磷酸化蛋白的表达水平,促进了MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES蛋白和mRNA的表达。予PNU-282987预处理RAW264.7和MOVAS细胞后,发现尼古丁诱导的RAW264.7细胞ERK1/2和c-Jun磷酸化及MOVAS细胞c-Jun磷酸化明显受到抑制。进而,尼古丁诱导的MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES蛋白和mRNA的高表达显著下调。[结论] α7-nAChR在巨噬细胞中通过调节ERK1/2/AP-1(c-Jun)信号通路抑制尼古丁诱导MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES表达的上调,在主动脉平滑肌细胞中通过调节AP-1(c-Jun)信号传导抑制尼古丁诱导MMP-9,MMP-2,MCP-1和RANTES表达的上调。α7-nAChR激动剂有望成为AAA新的治疗方案。
【图文】：

图 1. 尼古丁诱导 RAW264.7 细胞磷酸化 ERK1/2 和 c-Jun 蛋白的高表达。A）10 ng/ml 尼古丁刺激 RAW264.7 细胞 0，10，20，30，60 和 120 min。（E）0，0 和 100ng/ml 尼古丁刺激 RAW264.7 细胞 30 min。收集细胞裂解产物，用 Western b测定 p-ERK1/2，ERK1/2，p-c-Jun，c-Jun，p-p65 和 p65 的蛋白水平。p-ERK1/2（B 和），p-c-Jun（C 和 G）和 p-p65（D 和 H）的条带灰度值（均数±标准差）使用图像 J 进行测定，所有测量值均来自三个独立的不同的实验结果，GAPDH 作为实验内参。

2 U0126 抑制尼古丁诱导 RAW264.7 细胞 ERK1/2 和 c-Jun 的激活以及 MMP-9，MMP-，MCP-1 和 RANTES 蛋白和 mRNA 表达的上调。（A）先予 10μm 和 20μm U0126 预处理 RAW264.7 细胞 30 min，再予 10ng/ml 尼古丁刺激 30 min。用 Western blot 测定 p-ERK1/2，ERK1/2，p-c-Jun 和 c-Jun 蛋白水平。（D）先予 10μm 和 20μm U0126 预处理AW264.7 细胞 30 min，再予 10ng/ml 尼古丁刺激 3 h。采用 Western blot 测定 MMP-9，MMP-2，MCP-1 和 RANTES 蛋白水平。Western blot 蛋白条带（B，C 和 E-H）灰度值（均数±标准差）使用图像 J 软件进行测定。MMP-9 (I) ，，MMP-2 (J) ，MCP-1 (K)和
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.16

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本文编号：2627783