葛根素调控代谢反馈环干预压力超负荷大鼠心脏纤维化的机制研究

发布时间：2020-05-12 17:18

【摘要】：背景:心室重构是心血管死亡的危险因素,心脏纤维化参与心室重构的病理过程。葛根素可抑制心脏纤维化,但其机制尚不明确。目的:本研究围绕UDP-葡萄糖醛酸转移酶(UGT)底物与配体激活转录因子(ligand-activated transcription factors,LATFs)反馈环,探讨葛根素调控自身代谢酶与抑制心脏纤维化的可能共同通路,进一步揭示葛根素抑制心脏纤维化的机制。方法:腹主动脉缩窄术建立压力超负荷大鼠模型。超声心动图检测大鼠心脏结构及功能。右侧颈动脉插管检测大鼠血流动力学指标。HE染色法和masson染色法检测大鼠心脏纤维化程度。免疫组化法和western blot法检测大鼠心脏胶原Ⅰ、胶原Ⅲ及Nrf2的表达。采用Ang Ⅱ诱导乳鼠心脏成纤维细胞(NRCF)建立细胞纤维化模型,CCK-8法检测NRCF的活性,western blot法检测NRCF中Nrf2、UGT1A1、胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、P38 MAPK和p-P38 MAPK的表达,免疫荧光法检测NRCF中Nrf2的表达,荧光显微镜照相及荧光酶标仪检测NRCF中活性氧的含量,ChIP法检测葛根素对Nrf2与UGT1A1的作用。结果:①葛根素可抑制压力超负荷大鼠心肌肥厚和心脏纤维化,表现为降低心脏重量、心室壁厚度、左室收缩末压以及胶原的沉积(以胶原Ⅰ和胶原Ⅲ为主)的降低及心脏Nrf2的表达的上调。②葛根素可抑制Ang Ⅱ诱导的NRCF增殖,促进Nrf2表达并向核内转移,减少活性氧的产生,从而减少胶原I和胶原瓜的表达。使用Nrf2siRNA、Nrf2的激动剂和抑制剂均得出同样的结果。③western blot法显示葛根素呈时间依赖性地上调UGT1A1蛋白的表达。ChIP结果也提示葛根素可促进Nrf2结合到UGT1A1的启动子,上调自身代谢酶UGT1A1的表达。④葛根素明显抑制Ang Ⅱ诱导的P38MAPK的磷酸化。P38 MAPK的特异性抑制剂可抑制Ang Ⅱ诱导的NRCF的增殖和ROS的产生,减少胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的表达,且其作用独立于Nrf2。结论:葛根素抑制心脏纤维化作用可能与其激活Nrf2和抑制P38 MAPK的磷酸化有关。Nrf2是葛根素抑制心脏纤维化及上调自身代谢酶UGT1A1的共同转录因子。
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三、结果逡逑３．１葛根素对大鼠心室重构的影响逡逑图１为４％多聚甲醛处理２４小时的心脏标本，肉眼观察模型组心脏明显大逡逑于假手术组，而葛根素治疗６周后心脏明显小于模型组。各组ＳＤ大鼠心脏重量逡逑Ａｆ本重（ｈｅａｒｔ邋ｗｅｉｇｈｔ／ｂｏｄｙ邋ｗｅｉｇｈｔ，ＨＷ／ＢＷ）及心脏重量／胫骨长度（ｈｅａｒｔ邋ｗｅｉｇｈｔ／ｔｉｂｉａｌ逡逑ｌｅｎｇｔｈ，邋ＨＷＡＴＬ）见表１及图２。从表１及图２中我们可看出，模型组ＨＷ／ＢＷ逡逑和ＨＷＡＴＬ均较假手术组明显增加（Ｐ＜０．０５），而葛根素治疗６周后ＨＷ／ＢＷ和逡逑ＨＷ／ＴＬ较模型组明显降低（Ｐ＜０．０５ＸＳＤ大鼠心脏标本Ｈ＆Ｅ染色的结果（图３）逡逑显示与假手术组比较，，模型组ＳＤ大鼠左室壁明显增厚，而葛根素治疗６周后逡逑ＳＤ大鼠的左室壁厚度有所降低。逡逑丨？

本文编号：2660572