【摘要】：目的采用雌激素膜受体GPR30特异激动剂G1、特异拮抗剂G36为工具药,研究GPR30激活降低手术绝经大鼠全脑缺血后海马CA1区神经炎症损伤的作用,并揭示其可能的分子机制。方法1 SPF级雌性SD大鼠(3月龄)用于本研究。实验动物行双侧卵巢切除术建立手术绝经模型,并随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注14d组(Ischemia reperfusion,IR14d)、G1处理组(IR14d+G1)和G36处理组(IR14d+G1+G36)。采用四动脉结扎法制备大鼠全脑缺血模型(Global cerebral ischemia,GCI);2免疫荧光双染色观察GPR30等蛋白的细胞定位及蛋白表达水平;3 NeuN(生存神经元细胞核标志蛋白)免疫荧光染色及TUNEL技术观察海马CA1区神经元生存及凋亡情况;4 Western blot(WB)技术检测NLRP3炎性小体成员等蛋白表达水平;5 G1和G36的给药方式为切除大鼠卵巢同时皮下埋置微量释放泵至实验结束。结果1 GPR30激活降低GCI诱导的海马CA1区神经炎症损伤。GPR30与小胶质细胞标志蛋白Iba1免疫荧光双染色结果显示:与sham组相比,IR组Iba1免疫荧光强度显著增强,并呈现Iba1与GPR30较强的共定位;G1显著降低Iba1蛋白水平,且少见GPR30与Iba1的共定位;G36显著逆转了G1的影响。另外,NeuN免疫荧光染色和TUNEL分析结果显示:与sham组相比,GCI可诱导海马CA1区生存神经元(NeuN阳性染色)数量显著减少(P0.05),而凋亡样细胞(TUNEL阳性染色)显著增加(P0.05);给予G1后生存神经元数量显著增多(P0.05),而凋亡细胞数量则显著减少(P0.05),G36可逆转G1的作用。2GPR30激活降低海马CA1区炎性小体成员NLRP3、ASC蛋白表达。WB结果显示,G1可显著降低缺血后NLRP3和ASC的蛋白表达水平(P0.05),与Sham组相比无显著差异(P0.05),而给予G36后NLPR3和ASC的蛋白表达较G1处理组显著升高(P0.05)。NLRP3/Iba1、ASC/CD11b免疫荧光双染色结果验证了WB结果。并且,在IR组和G36处理组海马CA1区显示NLRP3、Iba1蛋白高表达且很强的共定位;同样,ASC和小胶质细胞标志蛋白CD11b的蛋白表达较G1和Sham组显著升高且二者高度共定位。3 GPR30激活抑制缺血后海马CA1区Caspase1激活(Cle-cas1)。WB结果显示,G1能够明显降低缺血后Cle-cas1的蛋白水平(P0.05),与Sham组相比无显著差异(P0.05),而给予G36后Cle-cas1水平较G1处理组明显升高(P0.05)。4 GPR30激活降低缺血后海马CA1区IL1β激活(Cle-IL1β)。WB结果显示,与IR组相比,G1可显著降低缺血后海马CA1区Cle-IL1β蛋白水平(P0.05);而G36处理组较G1处理组Cle-IL1β蛋白水平显著升高(P0.05)。CD11b与Cle-IL1β的免疫荧光双染色结果验证了WB结果;并且可见IR组和G36处理组海马CA1区Cle-IL1β与CD11b的免疫共定位。5 GPR30激活上调缺血后海马CA1区IL1β受体拮抗剂IL1RA的蛋白水平。WB结果显示,与IR组相比,G1能够明显升高缺血后海马CA1区IL1RA的蛋白表达水平(P0.05),而给予G36可逆转G1对IL1RA蛋白表达的影响,显著降低了IL1RA蛋白水平(P0.05)。CD11b与IL1RA的免疫荧光双染色结果验证了WB结果。IL1RA/NeuN、IL1RA/CD11b免疫荧光双染色结果显示,Sham组和G1处理组海马CA1区IL1RA表达于NeuN阳性染色细胞(P0.05),而IR组和G36处理组显示IL1RA主要定位在CD11b阳性染色的小胶质细胞(P0.05)。结论1 GPR30激活降低GCI后海马CA1区神经元的炎症损伤。2 GPR30激活降低GCI后海马CA1区NLRP3炎性小体活性。3 GPR30降低全脑缺血后海马CA1区神经炎症损伤的分子机制可能与其上调IL1RA的蛋白水平密切相关。图19幅;表0个;参184篇。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R541.78
【参考文献】
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2673306
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