LPS诱导的iNOS对动脉粥样硬化斑块中平滑肌的影响

发布时间：2020-06-03 17:28

【摘要】：动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病和退行性疾病,是心血管疾病最常见的病因,而平滑肌细胞在血管闭塞性疾病中起到重要作用。在健康情况下,炎症是一种正常的稳态反应,但在炎症长期存在的条件下,它从一种保护机制转变为一种有害反应,并可能导致进一步损害。在病理条件下产生大量一氧化氮的关键酶是iNOS(inducible nitric oxide synthase,诱导型一氧化氮合酶),在病理条件下,iNOS被认为是一种有害的酶。iNOS产生的大量一氧化氮与O_2~-反应生成ONOO~-,发生硝化反应,对组织造成损伤,从而参与动脉粥样硬化的形成。目的:本研究的目的是探讨过表达的iNOS对平滑肌细胞在参与动脉粥样硬化过程中的作用。方法:本研究中实验分为两个部分:人冠状动脉组织(狭窄程度小于百分之五十)实验和人主动脉平滑肌细胞实验。在人冠状动脉组织试验中,把人冠状动脉分成了两组,一组是正常无病变的组织,另一组是有动脉粥样硬化斑块且管腔狭窄程度小于百分之五十的血管,两组血管取材时都避开分叉处,对两组组织进行了western blot、pcr、免疫组化、HE染色、弹力纤维染色、Griess试剂盒检测实验,在人主动脉平滑肌细胞实验中,将细胞分成了两组,一组为正常的细胞组,另一组为加入LPS(lipopolysaccharide,脂多糖)的细胞组,对细胞进行了western blot、pcr、免疫荧光、CCK8、细胞划痕、细胞迁移、Griess试剂盒检测实验,另外本实验还下调了iNOS,分成了四组:iNOS下调组、i NOS下调加脂多糖组、iNOS下调阴性对照组、iNOS下调阴性对照加脂多糖组,检测平滑肌细胞的迁移能力,本实验中还下调了NF-κB信号通路里的p65,也分成四组:p65下调组、p65下调加脂多糖组、p65下调阴性对照组、p65下调阴性对照加脂多糖组,用western blot检测iNOS的表达量。结果:实验结果显示组织组western blot、pcr中iNOS表达量在动脉粥样硬化组比正常血管组高,免疫组化显示了iNOS在平滑肌源性的泡沫细胞中表达量多,且在细胞质表达,弹力纤维染色显示弹性纤维从中膜穿过了内弹力板到内膜,Griess试剂盒检测的动脉粥样硬化组NO的表达量比正常组多。细胞组western blot、pcr中iNOS的表达量在脂多糖组中比正常组中高,免疫荧光显示iNOS在脂多糖组表达多且在细胞质表达,CCK8、细胞划痕、细胞迁移显示脂多糖组细胞的增殖和迁移能力增强,Griess试剂盒检测的脂多糖组NO表达量比正常组多。结论:细胞实验结果表明动脉粥样硬化血管中iNOS表达增多,各种刺激因子如脂多糖通过NF-κB信号通路产生过量的i NOS,进而促进平滑肌细胞的增殖、迁移,使中膜的平滑肌细胞迁移到内膜,但是没有侵袭能力,从而参与动脉粥样硬化的形成。
【图文】：

表明了动脉粥样硬化的血管表达的 iNOS 比正常血管多，，且 iNOS 主要是在动脉粥样 硬 化 血 管 壁 的 平 滑 肌 细 胞 的 细 胞 质 中 表 达 增 多 。图1 血管组织中 iNOS 的表达情况 A 图为western blot 检测的正常血管和动脉

16图 2 平滑肌细胞的增殖和 iNOS 的表达情况 A 图为 CCK8 检测不同浓度、不同时间脂多糖对细胞的增殖作用 B 图为免疫荧光检测正常细胞和加入脂多糖的细胞中 iNOS 的表达 C 图为 western blot 检测正常细胞和加入脂多糖的细胞中 iNOS 的表达（*p<0.05） D 图为 pcr 检测正常细胞和加入脂多糖的细胞中 iNOS 的表达（*p<0.05）
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.5

【参考文献】

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1 Ning Shi;Shi-You Chen;;Mechanisms simultaneously regulate smooth muscle proliferation and differentiation[J];The Journal of Biomedical Research;2014年01期

本文编号：2695154