调节T细胞及细胞因子在免疫性血小板减少症发病中作用的初步研究

发布时间：2020-06-09 10:52

【摘要】：背景与目的免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)是一种以血小板破坏增多及生成不足为特征的自身免疫性出血性疾病。既往认为血小板自身抗体介导的体液免疫在ITP的发病过程中起着重要的作用。近年来,随着研究的深入,细胞免疫,尤其是T细胞免疫的异常在ITP发病中的作用也越来越受到关注。调节T细胞(regulatory T cell,Treg)是近年来受到重视的一类细胞,在维持机体免疫平衡方面起重要作用。有研究表明,ITP患者的骨髓、脾脏、和外周血中都有不同程度的CD4+Tregs数量明显减少,及其免疫抑制功能也显著下降。实验表明CD8+Tregs数量减少和功能缺陷也和自身免疫性疾病的发病有关。但在ITP患者中CD8+Tregs各亚群的数量及功能的变化,及其相应的CD8+CD28+T淋巴细胞,即细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)细胞水平的变化,尚未有详细报道。目前认为,细胞因子通过和免疫细胞的相互作用,在维持机体免疫平衡方面发挥重要作用。辅助T细胞可以分泌细胞因子来介导机体的一系列免疫反应。如:Th1细胞分泌的细胞因子主要为IL-2、IFN-γ、TNF-α等,Th2细胞分泌的细胞因子主要为IL-4、IL-5、IL-10等,Th17特异性分泌IL-17。另外,抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)、滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh细胞)等多种T细胞还可以分泌众多的细胞因子如IL-12、IL-23、IL-27等等。这些细胞因子在ITP发生中的作用尚待进一步证实明确。研究目的:(1)检测ITP患者和正常对照者外周血循环中CD4+Tregs(CD4+CD25+Foxp3+)、CD8+Tregs(CD8+CD28-Tregs、CD8+CD103+Tregs、CD8+CD25+Tregs)各亚群细胞、CD8+CD28+T细胞(CTL)数量比例,探讨CD4+Tregs、CD8+Tregs各亚群及CTL在ITP患者发病中的作用;(2)检测ITP患者及正常对照者体内不同细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF,IL-10、IL-17A、IL-12以及IL-21的含量水平,探讨ITP免疫失衡机制;(3)采用HD-DXM对ITP患者进行治疗,检测患者治疗前后CD4+Tregs、CD8+Tregs各亚群及CTL细胞数量比例的变化及各种细胞因子水平的变化,探讨激素治疗改善ITP患者细胞免疫异常可能的机制。研究方法收集2015年4月-2016年9月份安徽医科大学第一附属医院血液科住院的新确诊ITP的患者30例。同时入组20例健康成人作为正常对照。1.EDTA抗凝血分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)及血浆。以单克隆抗体标记PBMCs,流式细胞术检测ITP患者及正常对照淋巴细胞中的CD4+CD25+Foxp3、CD8+CD28-Tregs、CD8+CD103+Tregs、CD8+CD25+Tregs以及CD8+CD28+T细胞(CTL)的数量比例。2.采用流式细胞术检测ITP患者和正常对照外周血血清中细胞因子IL-2、TNF、IFN-γ、IL-10、IL-17A、IL-12、IL-21的水平。3.所有ITP患者均接受四天的连续大剂量地塞米松方案治疗(HD-DXM 40mg/d),治疗前留取患者EDTA抗凝外周血,治疗开始后第7天和第14天复查血常规,根据第14天血常规检测的血小板计数进行临床疗效评价,副反应评价,治疗后第14天留取EDTA抗凝外周血标本。流式细胞术检测治疗前后上述调节T细胞和CTL的数量比例变化和各种细胞因子水平的变化。研究结果1.ITP患者CD4+CD25+Foxp3占淋巴细胞的比例为1.500+0.813%,而正常对照组为3.42+0.752%,患者组与正常对照组相比差异有统计学意义(p0.05);患者组CD8+CD25+占淋巴细胞的比例为0.213+0.106%,正常对照组为3.16+0.566%;患者组CD8+CD103+占淋巴细胞的比例为2.127+0.858%,正常对照组为4.329+0.817%,患者组与正常对照组相比差异有统计学意义(p0.05);患者组CD8+CD28-细胞(CTL)占CD8+T淋巴细胞的比例为4.832+0.531%,而正常对照组为8.313+0.841%,患者组与正常对照组相比差异有统计学意义(p0.05);患者组CD8+CD28+占淋巴细胞的比例为40.853+12.178%,而正常对照组为4.765+1.000%,患者组与正常对照组相比差异有统计学意义(p0.05)。2.ITP患者血清中IL-2含量为3.460+1.323pg/ml,TNF的含量为37.494+8.013pg/ml;IFN-γ的含量为12.371+2.875 pg/ml;IL-12P70的含量为27.106+7.364pg/ml,IL-17A的含量为51.319+9.329 pg/ml,IL-21的含量为34.280+5.838pg/ml,患者组与正常对照组相比差异有统计学意义(p0.05);而IL-10的含量为1.647+0.566 pg/ml,患者组与正常对照组相比差异有统计学意义(p0.05)。3.大剂量地塞米松治疗后第14天进行疗效评估,分为完全反应(complete response,CR)、反应(response,R)、无反应(no response,NR),其CR、R、NR比率分别为60.00%、33.33%,6.67%,均未出现严重并发症和副反应。4.大剂量地塞米松治疗后,ITP患者CD4+CD25+Foxp3占淋巴细胞的比例为2.287+0.834%,CD8+CD25+Tregs占淋巴细胞的比例为2.702+0.748%,CD8+CD103+Tregs占CD8+T淋巴细胞的比例为3.64+1.058%,治疗后与治疗前相比差异有统计学意义(p0.05);而CD8+CD28-Tregs占淋巴细胞的比例为6.560+0.704%,治疗后与治疗前相比差异有统计学意义(p0.05);而CD8+CD28+(CTL)占CD8+T淋巴细胞的比例为11.052+2.549%,治疗后与治疗前相比差异有统计学意义(p0.05)。5.大剂量地塞米松治疗后,IL-2的水平为1.363+0.649pg/mL、TNF的水平为15.383+7.132 pg/mL,IFN-γ的水平为3.705+1.447 pg/mL,IL-12P70的水平为13.495+2.961 pg/mL,IL-17A的水平为19.430+5.310 pg/mL,IL-21的水平为9.208+1.505 pg/mL,治疗后与治疗前相比差异有统计学意义(p0.05),但仍高于正常对照组;IL-10的水平为5.437+0.978 pg/mL,治疗后与治疗前相比差异有统计学意义(p0.05),仍低于正常对照组。结论1.ITP患者外周血CD4+CD25+Foxp3+和CD8+Tregs各亚群与对照组相比有显著性差异,上述调节T细胞以及CTL在ITP疾病发生发展过程中可能参与其发病;2.ITP患者的多种细胞因子改变与对照组有显著性差异,多种细胞因子参与ITP的发病过程;3.HD-DXM能显著改善调节T细胞和多种细胞因子水平,参与细胞免疫,维持免疫平衡,可能是其治疗ITP的治疗机制之一。
【图文】：