mRNA、miRNAs及lncRNAs在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表达

发布时间：2020-06-20 13:25

【摘要】：研究背景:氯吡格雷作为一种口服抗血小板药物,本身没有活性,必须经过肝脏药物代谢酶细胞色素P450代谢活化生成其活性代谢产物(CAM)而发挥抑制血小板聚集的作用。研究表明,在服用标准剂量的氯吡格雷后,约15%～40%的冠心病病人不能获得预期的氯吡格雷抗血小板作用,这一现象被称之为“氯吡格雷抵抗”。然而,氯吡格雷抵抗的机制尚不完全清楚。有研究表明:外周血中的ABCC3 mRNA、miR-223的表达水平与氯吡格雷抵抗相关;肝组织中的miR-150与氯吡格雷的代谢酶相关;miR-542-3p可能与氯吡格雷的代谢酶相关。研究目的:探究外周血mmRNA、miRNA和IncRNA在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表达,寻找与氯吡格雷抵抗相关的分子标志物。研究方法:收集PCI术后口服氯吡格雷患者的临床资料和血标本,用电阻法检测血小板聚集率。对血小板聚集率结果进行排序后将患者分成4等份(Q1,Q2,Q3,Q4),Q1认为是氯吡格雷敏感(≤1Ω),Q4认为是氯吡格雷抵抗(10Ω)。1.ABCC3mRNA在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表达:选择氯吡格雷敏感患者与氯吡格雷抵抗患者各47例,提取白细胞总RNA,使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行总RNA质检。质控标准:总量≥0.11μ g;RNA完整性计数≥6.0;28S/18S≥0.7。合格的标本使用SYBR Green荧光定量PCR检测外周血白细胞中的ABCC3 mRNA;2.miR-223-3p在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表达:选择氯吡格雷敏感患者与氯吡格雷抵抗患者各47例,提取白细胞总RNA,使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行总RNA质检质控标准:总量≥0.14 μ g;RNA完整性计数≥6.0;28S/18S≥0.7。合格的标本使用Taqman荧光定量PCR检测外周血白细胞中的microRNA 223;3.miR-150、miR-542-3p在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表达:选择氯吡格雷敏感患者与氯吡格雷抵抗患者各5例,用mmiRNA芯片筛选有差异表达的microRNA。根据芯片筛选结果和文献选择2个有差异表达的microRNA(miR-150、miR-542-3p)进行 qRT-PCR 验证;4.lncRNAs在冠心病氯吡格雷抵抗患者中的表达:选择氯吡格雷敏感患者与氯吡格雷抵抗患者各5例,用lncRNA芯片筛选有差异表达的lncRNA。根据芯片筛选结果选择3个有差异表达的lncRNA(NONHSAT083775.2、NONHSAT107804.2、NONHSAT133455.2)进行 qRT-PCR 验证。结果:1、SYBRGreen荧光定量PCR检测了氯吡格雷敏感组(n=32)和氯吡格雷抵抗组(n=36)的白细胞ABCC3 mRNA水平,结果显示ABCC3 mRNA表达水平在两组间无显著差异(P=0.76)。2、TaqMan qRT-PC检测了氯吡格雷敏感组(n=24)和氯吡格雷抵抗组(n=36)的白细胞miR-223-3p水平,结果显示miR-223-3p表达水平在两组间无显著差异(P=0.94)。3、miRNA芯片筛选显示:氯吡格雷抵抗组白细胞中有21个microRNA上调,31个 microRNA 下调(P0.05)。qRT-PCR 验证显示:血浆中的 miR-150 和 miR-542-3p的表达水平在两组间均无显著差异(P=0.082、0.341)。4、lncRNA芯片筛查显示:氯吡格雷抵抗组白细胞中有11个lncRNA上调,8个lncRNA下调(P0.05)。qRT-PCR验证显示:与氯吡格雷敏感者比,氯吡格雷抵抗患者的外周血白细胞中有2个lncRNA(NONHSAT083775.2和NONHSAT107804.2)上调,1 个 lncRNA(NONHSAT133455.2)下调,与芯片分析结果一致。结论:1、冠心病患者外周血白细胞中的ABCC3 mRNA、mmiR-223-3p和外周血血浆中的miR-150、miR-542-3p的表达水平均与氯吡格雷抵抗无显著关联;2、冠心病患者外周血白细胞中的3个lncRNA(NONHSAT083775.2、NONHSAT107804.2和NONHSAT133455.2)的差异性表达与氯吡格雷抵抗相关。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.4
【图文】：

示意图,血小板聚集,示意图,纤维蛋白原

ＧＰ邋Ｉｌｂ／ＩＩＩａ分子的参与。在诱聚剂的激活下，ＧＰ邋Ｉｌｂ／ＩＩＩａ分子上的纤维蛋白原逡逑受体暴露，在Ｃａ２＋的作用下ＧＰ邋Ｉｌｂ／ＩＩＩａ分子和纤维蛋白原结合，从而连接相邻逡逑的血小板，使血小板聚集成团（图２）。逡逑＼ｋ邋ｆ逡逑４．邋４逡逑一，逦’厂邋＊逦％逦－逡逑＾邋Ｉ逦，★逡逑４邋／逡逑＼邋＾邋Ｉｎａｃｔｉｖｅ／ａｃｔｉｖｅ邋ａｉｌｂｐ３邋＾邋ＧＰＣＲ邋＃邋Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ逦Ｔｈｒｏｍｂｉｎ逡逑Ｉｎｓｉｄｅ－ｏｕｔ邋ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ逦Ｃａ２＊邋Ｃａｌｃｉｕｍ邋ｍｏｂｉｌｉｓａｔｉｏｎ逦ＡＤＰ／ＴｘＡ２逡逑图２血小板聚集示意图逡逑１３逡逑

血小板聚集率,氯吡格雷,静脉血,患者

对血小板聚集率结果进行排序后将患者分成４等份（Ｑｌ，Ｑ２，Ｑ３，邋Ｑ４），逡逑Ｑ１认为是氯吡格雷敏感（彡１Ｑ），Ｑ４认为是氯吡格雷抵抗（＞１０0）。一名患逡逑者血小板聚集率的结果如图１：逡逑Ｔｅｓｔ邋ＩＤ邋：邋２０１４０８０６－１－２逡逑ＴＲＡＣＥ邋１邋Ｄａｔｅ：邋２０１４－８－６邋Ｔｉｍｅ：邋１０：０２：１１逦Ｔｒａｃｅ邋１邋Ｔｒａｃｅ邋２邋Ｔｒａｃｅ邋３邋Ｔｒａｃｅ邋４逡逑Ｎａｍｅ：邋．逦———逦逦邋逦逡逑ＩＤ邋：逦Ｌａｂ邋：逦逦逦逦逦逦逡逑Ｂｌｏｏｄ邋Ｄｒａｗ邋Ｔｉｍｅ邋：逡逑ＲＡＣＥ逦逦１逦？逦邋0逦ｉ00逡逑Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ逦ＩＭＰ逡逑Ｒｅａｇｅｎｔ逡逑１０逦９０逡逑Ｓｔｉｒｒｅｒ逦１２００逡逑Ｇａｉｎ逦２０／５逦邋２0逦８０逡逑Ａｍｐｌｉｔｕｄｅ邋１４邋ｏｈｍ逡逑Ｓｌｏｐｅ逦７逦３0逦７０逡逑Ｌａｇ邋Ｔｉｍｅ逦０：０５逡逑Ａｒｅａ邋Ｕｎｄｅｒ逦５２．６逦扣逡逑ｃｏｒｎｍｅｎｌｓ逦ｇ５0－ｆ，逦５０逡逑Ｕ逡逑０）逡逑⑴邋６０逦邋４０逡逑７０逦—３０逡逑８０逦逦２

【参考文献】