不同心肌组织裂解液对BMSCs定向分化影响的初步研究

发布时间：2020-07-06 17:37

【摘要】：目的:完善对心肌组织样结构的鉴定,探究不同心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化的影响;探究组织工程化心肌的构建。方法:以全心组织裂解液定向诱导BMSCs分化为心肌组织样结构为实验对照,分别用心房肌组织裂解液、心室肌组织裂解液诱导BMSCs定向分化。倒置相差显微镜下观察诱导过程中细胞的形态变化,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫荧光细胞化学染色检测各组细胞相关蛋白(α-actin和cTnI),qRT-PCR检测各组细胞ANP、HCN4和MLC-2v基因的表达。采用免疫荧光组织化学染色方法,检测心肌组织样结构内相关蛋白(collagenⅠ、collagenⅢ、VEGF、vWF、CD31以及cTnI),探究心肌组织样结构的构成。结果:(1)全心组织裂解液能诱导BMSC分化为较复杂的心肌组织样结构,经免疫荧光染色法检测,可见结构内有cTn I、VEGF、vWF、CD31阳性细胞,细胞间检测出collagenⅠ、collagenⅢ,且以collagenⅠ为主。(2)全心组织裂解液能诱导BMSCs分化为较复杂的心肌组织样结构,在同等条件下,心房肌组织裂解液和心室肌组织裂解液不能诱导出心肌组织样结构。(3)心房肌组织裂解液组,在诱导分化的过程中,观察到有大量的分泌颗粒产生。(4)心房肌组织裂解液诱导组中可检测到ANP、HCN4高表达,MLC-2v不表达。心室肌组织裂解液诱导组中可检测到MLC-2v高表达,ANP、HCN4不表达。结论:全心组织裂解液诱导BMSCs形成的心肌组织样结构,不仅有心肌样细胞,还有早期分化的内皮样细胞;结缔组织包裹心肌样细胞形成束状结构,内含大量主要成分为Ⅰ型胶原蛋白的胶原纤维。心房肌组织裂解液可诱导BMSCs向心房肌细胞方向分化,心钠素ANP高表达,窦房结细胞标志物HCN4高表达。心室肌组织裂解液可诱导BMSCs向心室肌细胞方向分化,心室肌细胞特异性肌球蛋白轻链MLC-2v高表达。功能活动对形态与结构的发生、发育有重要的促进作用,是形态与结构发育成熟的必备条件。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R542.2
【图文】：

-aP0BMSCs培养3d（×5）

-bP0BMSCs培养7d（×5）

-c P3 BMSCs 培养 3d（×5） 图 1-1-d P3 BMSCs 培养 7d（×5）

【参考文献】

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本文编号：2743926