外周血红细胞微粒水平与冠脉病变严重程度关系的临床研究

发布时间：2020-07-12 22:12

【摘要】：研究背景急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome,ACS)是心肌急性缺血所导致的一系列临床表现,主要发病机制是粥样斑块破裂、破损,继而引起血栓形成,最终影响心脏血供。世界卫生组织(Worldhealthorganization,WHO)公布的数据显示,每年有近740万人死于缺血性心脏病,其中ACS是全球十大死亡病因之一。绝大多数ACS的发生都与血栓形成有关,而血栓形成则与血管内皮细胞损伤和体内高凝状态密切相关。现有的冠脉病变检查金标准——冠状动脉造影,能准确评估冠状动脉的狭窄程度,但是不能评价血管内皮损伤程度以及评估粥样斑块稳定性,并且具有侵入性及相对滞后性的缺点。因此我们需要寻找一种无创的、早期的生物标志物,用来评估冠脉病变严重程度、预测ACS风险。血液中的血细胞(如血小板、白细胞、红细胞等)与血管壁细胞(如内皮细胞、平滑肌细胞)在受到血管高应力、氧化产物等病理刺激时,产生并释放直径为0.1～1 μm的小囊泡,这些小囊泡称为细胞微粒(Microparticles,MPs)。由红细胞释放的小囊泡称之为红细胞微粒(Erythrocyte-derived microparticles,ErMPs)。ErMPs不仅能直接清除内皮保护因子——氧化氮(Nitricoxide,NO),还可以降低NO的生物利用度,间接损伤内皮细胞功能。另外,ErMPs的膜外层具有大量磷脂酰丝氨酸,能激活凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ,引起凝血级联反应,从而促进血栓形成。研究发现,ErMPs与血栓栓塞性疾病密切相关,在患有阵发性睡眠性血红蛋白尿症、肾病综合征、克罗恩病的人群中明显升高。在FeCl3介导的血栓形成模型中,ErMPs还可以通过介导血小板粘附至完整的内皮表面参与血栓的形成。这些证据进一步提示了 ErMPs可能参与ACS的内皮损伤、凝血激活等病理过程。综上所述,我们得出以下推测:ErMPs与冠脉病变发生恶化有关,其有可能协助评价冠脉病变严重程度;ACS患者ErMPs显著升高,ErMPs可能是预测ACS风险的新生物标志物。基于以上问题,我们设计了该研究课题。研究目的1.探讨ACS组以及ACS亚组与对照组间ErMPs水平的差异;2.分析ErMPs对ACS风险以及对UA风险、AMI风险的预测价值;3.研究ErMPs水平和冠脉病变严重程度的关联性;4.探讨ErMPs水平预测冠状动脉狭窄程度的价值。材料与方法1.选择对照人群和ACS人群总共305例对照组:患者既往无冠心病(Coronary artery disease,CAD),冠状动脉造影结果示管腔无狭窄或狭窄程度50%。共70例(男性41例,女性29例,平均年龄 59±10 岁)。ACS组:冠状动脉造影结果示管腔狭窄程度≥50%,ACS组再分为不稳定型心绞痛(Unstable angina,UA)组和急性心肌梗死(Acutemyocardial infarction,AMI)组两个亚组,符合2016年中国医师协会、中华医学会诊断标准。(1)UA组:共159例(男性104例,女性55例,平均年龄62±8岁)。(2)AMI组:共76例(男性58例,女性18例,平均年龄60±8岁)。2.标本采集及临床病例资料收集(1)标本采集:冠状动脉造影手术前,采集外周血液标本并离心得到乏血小板血浆(Platelet-poor plasma,PPP),留待进行流式细胞术检测。(2)病例资料收集:年龄、性别、心率、血压等基本临床资料;血脂、血糖、血肌酐、红细胞计数等实验室资料;冠状动脉造影结果;是否服用阿司匹林、氯吡格雷/替格瑞洛、他汀类等用药情况。(3)Gensini评分:基于冠状动脉造影结果,Gensini评分系统可以用来评估冠状动脉管腔的狭窄程度。在该评分系统中,冠状动脉包括14段,各段病变血管权重系数与管腔狭窄程度权重系数乘积的总和即Gensini评分。3.ErMPs检测与分析采用美国BD公司生产的流式细胞分选仪检测,CD235a-APC和Annexin V-FITC标记ErMPs。用FlowJo软件分析检测结果。根据所收集的细胞微粒事件数和绝对计数荧光微球事件数、绝对计数荧光微球已知的浓度、所测血浆标本的体积,计算得出血浆中ErMPs浓度和ErMPs比率。4.统计分析采用软件SPSS19.0进行统计分析,P0.05视作差异有统计学意义。独立样本t检验或One-way ANOVA比较符合正态分布且方差齐性的连续型数值变量的组间差异,LSD-t检验进行两两比较,不符合正态分布和方差齐性的连续型数值变量的组间差异使用非参数检验;χ2检验比较频数资料和非等级参数资料;简单相关和多元线性回归分析ErMPs浓度、ErMPs比率的影响因素;协方差分析三组间的ErMPs浓度、ErMPs比率的差异;Logistic回归分析ErMPs浓度、ErMPs比率与ACS风险的关联性;简单相关和多元线性回归分析ErMPs浓度、ErMPs比率与冠状动脉狭窄程度的关联性;ROC工作曲线分析ErMPs浓度、ErMPs比率预测冠状动脉狭窄程度的价值。结果1.对照组、UA组、AMI组基本临床资料的比较:性别、年龄在对照组、UA组、AMI组三组间差异无统计学意义(P0.05)。心血管危险因素中:高血压病史、饮酒史在三组间的差异无统计学意义(P0.05);与对照组相比,UA组糖尿病史(P0.001)、吸烟史(P=0.021)、陈旧性心肌梗死/PCI手术史(P0.001)显著升高,AMI组糖尿病史(P=0.006)、CAD家族史(P=0.021)、吸烟史(P=0.004)、陈旧性心肌梗死/PCI手术史(P0.001)显著升高;糖尿病史、吸烟史、陈旧性心肌梗死/PCI手术史在UA组和AMI组间差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,UA组收缩压(P0.001)、舒张压显著升高(P=0.011);与UA相比,AMI组收缩压显著降低(P0.001);三组间心率的差异无统计学意义(P0.05)。2.对照组、UA组、AMI组实验室资料的比较:三组间的甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、红细胞计数、血红蛋白、RDW差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,UA组高密度脂蛋白胆固醇显著降低(P=0.013)、空腹血糖显著升高(P=0.021),AMI组高密度脂蛋白胆固醇显著降低(P0.001)、空腹血糖显著升高(P0.001)、肌钙蛋白I显著升高(P0.001);与UA组相比,AMI组高密度脂蛋白胆固醇显著降低(P=0.001)、血清肌酐显著升高(P=0.001)、肌钙蛋白I显著升高(P0.001)。3.对照组、UA组、AMI组用药情况的比较:与对照组相比,UA组和AMI组阿司匹林、氯吡格雷/替格瑞洛、硝酸酯类、他汀类、ACEI/ARB的使用率均显著升高(P0.001),这些药物在UA组和AMI组间差异无统计学意义(P0.05);与对照组相比,UA组β受体阻滞剂使用率显著升高(P=0.002);AMI组低分子肝素使用率较其他两组明显升高(P0.001);钙离子通道阻滞剂在三组间的差异无统计学意义(P0.05)。4.对照组、UA组、AMI组冠脉病变严重程度的比较:与对照组相比,UA组和AMI组冠状动脉最重狭窄程度、狭窄病变数、狭窄分支数以及Gensini评分均显著升高(P0.001)。与UA组相比,AMI组冠状动脉最重狭窄程度显著升高(P=0.028),AMI组、UA组和AMI组间的狭窄病变数、狭窄分支数以及Gensini评分差异均无统计学意义(P0.05)。5.影响ErMPs浓度的因素:简单相关分析发现,ErMPs浓度与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关(r=-0.128,P=0.050);秩和检验分析发现,与无CAD家族史组别相比,有CAD家族史的组别ErMPs浓度显著升高(P=0.034);与未服用钙离子通道阻滞剂组相比,服用钙离子通道阻滞剂组ErMPs浓度显著降低(P=0.036);多元线性回归分析发现,高密度脂蛋白胆固醇(β=-0.156,P=0.016)、CAD家族史(β=0.152,P =0.019)是ErMPs浓度的独立影响因素。6.影响ErMPs比率的因素:简单分析发现,ErMPs比率与血清肌酐呈正相关(1=0.169,P=0.009)、与肌钙蛋白1呈正相关(r=0.131,P=0.045);秩和检验分析发现,男性ErMPs比率较女性显著升高(P=0.002),有饮酒史组ErMPs比率较无饮酒史组显著升高(P=0.039),服用钙离子通道阻滞剂组ErMPs比率较未服用钙离子通道阻滞剂组显著降低(P=0.020);多元线性回归分析发现,血清肌酐(β=0.155,P=0.016)、钙离子通道阻滞剂(β=-0.141,P=0.029)是 ErMPs 比率的独立影响因素。7.对照组、UA组、AMI组ErMPs水平的比较:在未控制混杂因素的情况下,与对照组相比,ACS组ErMPs浓度显著升高(P=0.021)。与对照组相比,UA组(P=0.019)和AMI组(P=0.005)的ErMPs浓度显著升高;ErMPs浓度在UA组和AMI组间差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,ACS组ErMPs比率升高,但未达到统计学差异(P0.05)。亚组间比较,与对照组相比,UA组和AMI组的ErMPs比率升高,但尚未达到统计学差异(P0.05);ErMPs比率在UA组和AMI组间差异也无统计学意义(P0.05)。控制混杂因素(性别、饮酒史、CAD家族史、血清肌酐、高密度脂蛋白胆固醇、红细胞计数、RDW、CCB),ErMPs浓度在三组间的差异有统计学意义(P=0.040)。与对照组相比,UA组(P=0.028)和AMI组(P=0.022)ErMPs浓度均显著升高。ErMPs浓度在三组间的差异无统计学意义(P0.05)。8.ErMPs浓度、ErMPs比率分别与ACS风险的关联性:ErMPs浓度(OR=1.009,95%CI[1.002-1.017],P=0.015)、收缩压(OR=1.034,95%CI[1.015-1.053],P0.001)、糖尿病史(OR=3.048,95%CI[1.368-6.791],P=0.006)、肌钙蛋白 I(OR=1.021,95%CI[1.000-1.043],P=0.048)是 ACS 的危险因素。ErMPs比率(OR=1.476,95%CI[0.311-7.008],P=0.624)与 ACS 仍然不具有关联性。9.ErMPs浓度、ErMPs比率分别与UA、AMI风险的关联性:ErMPs浓度(OR=1.009,95%CI[1.001-1.016],P=0.020)是UA的危险因素,高密度脂蛋白胆固醇(OR=0.278,95%C1[0.089-0.867],P=0.027)是 UA 的保护性因素。ErMPs浓度(OR=1.0]0,95%CI[1.002-1.018],P=0.014)是 AMI 的危险因素。ErMPs比率(OR=1.254,95%CI[0.279-5.645],P=0.768)与 UA 不具有关联性。ErMPs比率(OR=4.319,95%CI[0.769-24.251],P=0.097)与 AMI 也不具有关联性。10.ErMPs浓度、ErMPs比率与冠脉病变严重程度的相关性分析:ErMPs浓度(β=0.206,P=0.00)、年龄(β=0.607,P=0.001)、空腹血糖(β=0.272,P=0.008)、陈旧性心肌梗死/PCI手术史(β=0.154,P0.001)与Gensini评分呈正相关,高密度脂蛋白胆固醇(β=-0.389,P=0.011)与Gensini评分呈负相关。ErMPs比率(β=0.161,P=0.023)、年龄(β=0.644,P=0.001)、空腹血糖(β=0.292,P=0.007)、陈旧性心肌梗死/PCI手术史(β=0.162,P0.001)与Gensini评分呈正相关,高密度脂蛋白胆固醇(β=-0.422,P=0.006)与Gensini评分呈负相关。11.ErMPs浓度、ErMPs比率以及两者联合预测冠状动脉狭窄≥50%的价值:ErMPs 浓度:AUC:0.624,95%CI:0.567-0.679;ErMPs 比率:AUC:0.548,95%CI:0.490-0.605;ErMPs 浓度与 ErMPs 比率联合模型:AUC:0.628,95%CI:0.552-0.704。12.ErMPs浓度、ErMPs比率以及两者联合预测冠状动脉狭窄≥70%的价值:ErMPs浓度:AUC:0.617,95%CI:0.559-0.671;ErMPs比率:AUC:0.565,95%CI:0.508-0.622;ErMPs 浓度与 ErMPs 比率联合模型:AUC:0.615,95%CI:0.549-0.681。结论1.ACS患者的ErMPs浓度显著升高,ErMPs浓度与ACS的发生相关联,ErMPs有望成为预测ACS风险的生物标志物;2.UA、AMI患者的ErMPs浓度显著升高,ErMPs浓度与UA、AMI的发生相关联,ErMPs有望成为预测UA、AMI风险的生物标志物;3.ErMPs浓度、ErMPs比率与冠脉病变严重程度呈正相关,ErMPs可能成为预测冠脉病变严重程度的生物标志物;4.ErMPs浓度对冠脉病变严重程度的预测价值优于ErMPs比率。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R541.4

【参考文献】