膳食锌干预HFpEF大鼠心肌锌转运体及内质网应激的变化

发布时间：2020-07-17 08:29

【摘要】：目的探讨不同浓度膳食锌干预下HFpEF大鼠心肌中Zn~(2+)浓度变化以及锌转运体Zip7、Zip10及内质网应激相关因子表达变化。方法1.在建立的HFpEF大鼠模型基础上检测实验组及对照组大鼠血清及心肌组织中Zn~(2+)的浓度:本课题组另一成员(张明哲)在前期实验中已采用达尔盐敏感性雄性大鼠(DSS大鼠)建立了HFpEF的动物模型。其将DSS大鼠随机分为5组(每组12只),其中模型组/实验组分为4组,包括高盐低锌饮食组(HL组)、高盐正常锌饮食组(HN组)、高盐高锌饮食组(HH90组)以及高盐极高锌饮食组(HH270组);对照组为正常盐正常锌饮食组(NN组)。实验组的高盐饲料中氯化钠的含量均为8%,而各实组饲料中锌的含量分别为10mg/kg、30mg/kg、90mg/kg以及270mg/kg;对照组饲料中氯化钠的含量则为0.3%、锌的含量为30mg/kg;其它饲料组份的含量以及饲养的条件各组间均相同。然后从7周龄饲养至20周龄,通过症状体征、超声心动、湿肺/干肺比值、血清及心肌组织BNP含量等对模型进行评价,并留取心脏及血清标本。在此基础上,采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICPOES)检测各大鼠血清及心肌组织中Zn~(2+)的浓度。2.检测实验组及对照组大鼠心肌组织中锌转运体Zip10的表达情况:使用实时定量聚合酶链锁反应(qPCR)及蛋白免疫印迹(WB)分别检测各大鼠心肌组织中锌转运体Zip10的mRNA及蛋白表达情况。3.检测实验组及对照组大鼠心肌组织中内质网应激情况:使用qPCR及WB分别检测各大鼠心肌组织中CHOP、Bip等内质网应激相关因子的mRNA及蛋白表达情况。4.检测实验组及对照组大鼠心肌组织中锌转运体Zip7的表达情况:使用qPCR及WB分别检测各大鼠心肌组织中锌转运体Zip7的mRNA及蛋白表达情况。结果1.ICPOES结果显示,实验组大鼠心肌组织Zn~(2+)浓度明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),各实验组之间差异无统计学意义(P0.05);实验组大鼠血清Zn~(2+)浓度明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。2.qPCR和WB结果显示,实验组大鼠心肌组织中锌转运体Zip10的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),各实验组之间差异无统计学意义(P0.05)。3.qPCR和WB结果显示,实验组大鼠心肌组织中CHOP、Bip等内质网应激相关因子的mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),各实验组之间差异无统计学意义(P0.05)。4.qPCR和WB结果显示,实验组大鼠心肌组织中锌转运体Zip7的mRNA和蛋白表达水平略高于对照组,差异无统计学意义(P0.05),实验组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论1.HFpEF大鼠血清Zn~(2+)浓度降低,心肌组织Zn~(2+)浓度升高,锌稳态失衡。2.HFpEF大鼠心肌组织中锌转运体Zip10的mRNA和蛋白表达下调。3.HFpEF大鼠心肌组织中内质网应激水平增高。4.不同浓度膳食锌干预对HFpEF大鼠心肌组织中Zn~(2+)浓度、锌转运体Zip7、Zip10表达情况和内质网应激水平未见影响。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R541.6
【图文】：

外观特征,周龄,大鼠,实验组

A. 实验组大鼠 B.对照组大鼠图 1.20 周龄时，实验组与对照组大鼠的外观特征1.2.3 心肌组织锌离子浓度的测定（1）心肌组织的消解①将 5ml 小烧杯经泡酸、清水洗净、高压灭菌等处理后备用。②用天平称取约 50mg 的心肌组织并放入到称量过重量的 1.5ml EP 管中，放入真空干燥箱中在 60℃ 1.5h 条件下烘干心脏组织，再次称量重量，将烘干的心脏组织放入到小烧杯中，向烧杯中加入 1ml 生理盐水，用干净的剪刀将心肌组织剪碎后加入 2ml 65%的浓硝酸，同时将石墨可控温电热板放在通风橱中并将温度调至 120℃，将装有心肌组织的烧杯放在板面上，加热约 1h，使硝酸完全挥发为止。③向加热好的小烧杯中加入 0.6ml 65%浓硝酸及 2.4ml 的超纯水，使硝酸浓度变成 13%。④将小烧杯放入超声波清洗机中（避免水进入烧杯），使烧杯中的物质充

心肌组织,实验组,硕士学位论文

天津医科大学硕士学位论文结果大鼠心肌组织中 Zn2+浓度升高，血清中 Zn2+浓度降大鼠心肌组织中 Zn2+浓度升高CPOES 检测，结果发现，实验组大鼠心肌组织中 Zn2+浓度134.39±53.09 ug/g，HN 139.92±56.55 ug/g，HH90 122.07±.76±31.22 ug/g VS NN 71.43±28.19 ug/g ），差异有统，各实验组之间差异无统计学意义（p＞0.05）。（见图

相对浓度,实验组,对照组,心肌组织

** vs.对照组 p<0.01，#.两者相比 p<0.05图 3.血清 Zn2+相对浓度鼠心肌组织中锌转运体 Zip10 表达下调织中锌转运体 Zip10 mRNA 表达下调CR 检测，结果发现，实验组各组大鼠心肌组织 Zip10对照组，差异有统计学意义（p<0.05），各实验组之0.05）。（见图 4）

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