microRNA-21对心肌纤维化的调控作用以及雷公藤红素干预研究
发布时间：2020-07-18 02:41
【摘要】：第一部分miR-21对心肌成纤维细胞的调控作用和机制研究【目的】心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)是心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)的效应细胞。CFs的功能状态在MF的病理进程中有核心作用。研究发现miR-21参与纤维化疾病的调控。此部分研究将对miR-21调控CFs功能和状态的作用和机制进行探讨。【方法】分离培养原代小鼠心肌成纤维细胞,构建促细胞纤维化模型(TGF-β1),转染miR-21类似物(miR-21 mimic)、miR-21抑制物(miR-21 inhibiter),抑制或过表达细胞miR-21。随机分为正常对照组、TGF-β1组、miR-21-mimic组、TGF-β1+miR-21inhibiter组。real-time PCR方法检测miR-21的表达,免疫印迹法法检测α-SMA、p ERK/ERK的表达,MTT法检测细胞增殖水平,El ASA法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原的表达。【结果】与正常对照组比较,TGF-β1组CFs的增殖能力明显增加,差异有统计学意义(P0.05),TGF-β1组较正常对照组CFs胶原合成和α-SMA的表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05);TGF-β1能够上调CFs的miR-21的水平;与正常对照组进行比较,miR-21 mimic组CFs的增殖能力明显增加(P0.05),CFs胶原合成和α-SMA表达增加,TGF-β1+miR-21-inhibiter组较TGF-β1组,胶原表达降低(P0.05),α-SMA的表达水平也有所降低(P0.05);miR-21 mimic组较正常对照组细胞p ERK/ERK的水平增加,差异具有显著性(P0.05),而TGF-β1+miR-21-inhibiter组较TGF-β1组,p ERK/ERK表达显著降低(P0.05)【结论】本部分研究表明miR-21可能是TGF-β1的下游调节因子,对CFs具有促纤维化效应,促进CFs增殖与活化,增加胶原合成和α-SMA的表达;miR-21可能通过调控p ERK/ERK介导TGF-β1的效应。第二部分miR-21对内皮细胞发生内皮-间质转化的作用和机制研究【目的】内皮-间质转化(endothelial-mesenchymal transition,End MT)是肌成纤维细胞的来源之一。End MT通过内皮细胞失去固有特征性和获得的间充质细胞表型而来。本部分建立离体培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)模型,探讨miR-21对End MT的影响和机制。【方法】分离和培养HUVECs,建立TGF-β1诱导HUVECs发生End MT模型,转染miR-21 mimic,miR-21 inhibite以抑制或过表达miR-21。实验分为4组:正常对照组、TGF-β1组、miR-21-mimic组、TGF-β1+miR-21 inhibiter组。real-time PCR方法检测miR-21的表达。免疫荧光、免疫印迹检测内皮细胞标记物CD-31和间质细胞的标记物FSP-1的表达。【结果】TGF-β1上调HUVECs的miR-21的水平,与正常对照组相比有显著性差异(P0.05);TGF-β1/miR-21能够诱导HUVECs发生End MT,表现为内皮细胞的标记物CD31表达降低(P0.05),而间质细胞的标记物FSP-1表达增加(P0.05);抑制miR-21能够部分抑制TGF-β1诱导的End MT。【结论】TGF-β1能够通过调控miR-21诱导HUVECs发生End MT;抑制miR-21能够部分抑制TGF-β1诱导的End MT。第三部分雷公藤红素对心肌成纤维细胞的调节作用和机制研究【目的】雷公藤红素是从雷公藤根部提取的一种有效的天然生物活性化合物。它已被证明在抗炎,抗癌,抗风湿和自身免疫性疾病方面非常有价值。研究发现雷公藤红素有心脏保护作用。miR-21参与调控CFs的增殖与活化。本部分研究旨在探讨雷公藤红素对CFs功能状态以及是否能够调控miR-21并且进行机制探讨。【方法】分离培养原代小鼠CFs,构建TGF-β1促细胞模型,雷公藤红素进行干预。随机分为正常对照组、TGF-β1组、TGF-β1+雷公藤红素组。real-time PCR方法检测miR-21的表达,免疫印迹法检测α-SMA、p ERK/ERK的表达;MTT法检测细胞增殖水平;El ASA法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原的表达。【结果】MTT法检测CFs的增殖,分析数据发现雷公藤红素对CFs的抑制作用有浓度依赖性。用不同浓度的雷公藤红素(0.2,1,5μM)进行干预,能够抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞的X椫乘皆黾
本文编号：2760285
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