血管紧张素Ⅱ诱导小鼠动脉粥样硬化机制的研究

发布时间：2020-07-27 09:14

【摘要】：目的:研究血管紧张素II(Angiotensin II,Ang II)诱导动脉粥样硬化病变及其机制,进一步探讨自噬和脂质代谢在Ang II诱导的动脉粥样硬化病变发生和发展中的作用。方法:本研究采用雄性6~8周龄apoE~(-/-)小鼠,通过皮下植入Mini-osmotic Pump慢性灌输Ang II并配以普通饲料或高脂饲料饲喂八周,建立动脉粥样硬化模型,同时给予ATI受体阻断剂(Losartan)、抗氧化剂(Tempol)、NADPH氧化酶抑制剂(Apocynin)、线粒体K_(ATP)通道阻断剂(5-hydroxy decanoic acid salt,5-HD)和自噬抑制剂(3-methyladenine,3-MA)。定时检测血压、体重的变化,通过全自动生化分析仪检测血清中血脂的变化,并计算动脉硬化指数的变化;通过油红O染色检测小鼠整体主动脉斑块面积变化;用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,Q-PCR)检测apoE~(-/-)小鼠主动脉中Beclin-1、LC3-II mRNA和肝脏中脂质代谢相关基因乙酰辅酶A羧化酶a(Acetyl COA carboxylase-a,ACCa)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FASN)、载脂蛋白AI(Apolipoprotein AI,apoAI)、肝X受体α(Liver X receptorα,LXR-α)、低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)、B族I型清道夫受体(Scavenger receptor class B type I,SR-BI)mRNA表达量变化,用蛋白质印迹法Western blot方法检测apoE~(-/-)小鼠主动脉中自噬蛋白LC3、Beclin-1表达量的变化。结果:1.油红O结果显示,Ang II慢性灌输导致主动脉斑块相对面积增加,而给与ATI受体阻断剂、抗氧化剂、NADPH氧化酶抑制剂、线粒体K_(ATP)通道阻断剂抑制主动脉斑块相对面积的增加。血压结果显示,Ang II慢性灌输可导致高血压的发生,而给予ATI受体阻断剂,抗氧化剂,NADPH氧化酶抑制剂,线粒体K_(ATP)通道阻断剂抑制了高血压的发生。2.Western blot和Real-time PCR结果显示,Ang II慢性灌输可诱导主动脉中自噬相关基因Beclin-1,LC3-II mRNA和蛋白表达量增加,而给予ATI受体阻断剂、抗氧化剂、NADPH氧化酶抑制剂、线粒体K_(ATP)通道阻断剂后自噬相关基因Beclin-1,LC3-II mRNA及蛋白表达量均减少。另外,给予自噬抑制剂显著抑制了Ang II慢性灌输诱导的高血压的发生及发展,动脉粥样指数的增加,主动脉斑块面积的增加及自噬相关基因Beclin-1,LC3-II mRNA和蛋白表达量增加。3.血脂四项检测结果显示,Ang II慢性灌输导致血清中总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)含量显著性升高及动脉粥样硬化指数增加,而给予ATI受体阻断剂、抗氧化剂、NADPH氧化酶抑制剂、线粒体K_(ATP)通道阻断剂和自噬抑制剂显著抑制了血清中TC、TG和LDL含量的升高和动脉粥样硬化指数增加。Real-time PCR结果显示,Ang II慢性灌输导致肝脏中脂肪合成相关酶乙酰辅酶A羧化酶a(ACCa)、脂肪酸合成酶(FASN)mRNA的表达量显著性升高;胆固醇代谢相关基因LXR-α、LDLR mRNA表达量显著性降低,SR-BI mRNA的表达量显著性升高。而给予AT1受体阻断剂、抗氧化剂、NADPH氧化酶抑制剂、线粒体K_(ATP)通道阻断剂和自噬抑制剂选择性调控了Ang II慢性灌输引起的各脂质代谢基因表达变化。结论:1.Ang II诱导的动脉粥样硬化病变由通过AT1受体介导的,氧化应激参与了Ang II诱导的动脉粥样硬化病变,其机制是激活NADPH氧化酶、开放线粒体K_(ATP)通道。2.Ang II激活的自噬信号通路在动脉粥样样硬化病变的发生及发展中发挥重要作用。3.Ang II可引起血脂异常和肝脏参与的脂质代谢调控基因异常表达,而AT1体阻断剂、抗氧化剂、NADPH氧化酶抑制剂、线粒体K_(ATP)通道阻断剂和自噬抑制剂可能通过调控不同的脂质代谢基因发挥各自抗动脉粥样硬化的作用。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.5
【图文】：

12图 2.2 . 不同处理组间小鼠血压和心率的变化Fig 2.2 Change of mice blood pressure and heart rate between differeneatment groups (n=5, # P < 0.05 vs. control; *P < 0.05 vs. high fat; P < 0.05 vs. An

图 2.3 . 不同处理组间小鼠动脉粥样硬化斑块面积变化分析Fig2.3 Changes of Atherosclerotic plaque area between different treatmentgroups (n=5, # P < 0.05 vs. control; *P < 0.05 vs. high fat; P < 0.05 vs. Ang II)2.2.4 Ang II诱导动脉粥样硬化病变对apoE-/-小鼠动脉硬化指数的影响

图 2.4 不同处理组小鼠动脉硬化指数分析ig2.4 Analysis of mice arteriosclerosis index in different treatment g(n=10, # P < 0.05 vs. control; *P < 0.05 vs. high fat; P < 0.05 vs. Ang II) 讨论

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本文编号：2771649