红曲对动脉粥样硬化小鼠肠道炎症及肠道屏障功能的影响

发布时间：2020-08-01 15:19

【摘要】：目的:通过建立动脉粥样硬化小鼠模型,研究红曲(Red yeast rice)对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)小鼠肠道炎症及肠道屏障功能的影响,探讨其保护作用。方法:1.动物分组:18只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠,体重(22±2)g。适应性喂养1周后小鼠按体重随机分为:空白对照组(CK);动脉粥样硬化模型组(AS);红曲组(RYR)。动脉粥样硬化模型组,红曲组喂食高脂高胆固醇饲料(含15%猪油+0.25%胆固醇),空白对照组喂食普通饲料。红曲组每天0.34 g/kg.d红曲灌胃,其它组在同等时间给予等量生理盐水灌胃。实验周期为12周。最后一次灌胃后小鼠禁食12 h,摘取眼球取血,离心,取血清。将小鼠在冰上行心脏灌注,灌注完毕,在冰上取出主动脉、空肠和盲肠内容物,根据实验要求做相应处理,剩余组织-80℃冰箱保存。2.检测小鼠主动脉粥样硬化形成情况:对小鼠主动脉大体行油红O染色,对动脉粥样斑块面积进行定量。3.检测红曲对血脂的影响:利用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(tryglyeride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)。4.苏木精-伊红染色法(hematoxylin eosin,HE)观察空肠病理变化。5.透射电镜观察小鼠空肠组织超微结构的改变。6.蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测空肠组织中紧密连接蛋白occludin、JAM-1的表达水平。7.蛋白质印迹法检测空肠组织中肿瘤坏死因子-α(Tummor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)的蛋白表达水平。8.16S rDNA高通量测序进行盲肠内容物肠道菌群结构分子生态学分析。结果:1.对小鼠主动脉行油红O染色后,进行分析统计。模型组与对照组相比斑块面积显著增加(P0.05);红曲干预后与模型组相比斑块面积显著减少(P0.05)。2.与空白对照组相比模型组血清总胆固醇显著升高(P0.05),红曲组与模型组相比总胆固醇显著降低(P0.05);红曲组与空白对照组和模型组相比低密度脂蛋白胆固醇均显著降低(P0.05)。3.HE染色结果显示,空白对照组空肠黏膜无病理性改变,绒毛及腺体均完整;与空白对照组相比,动脉粥样硬化模型组肠黏膜上皮脱失,肠绒毛不清,黏膜充血,空肠绒毛高度与对照组相比降低30.44%(P0.05);红曲干预后肠绒毛轻度脱失,黏膜基本正常,空肠绒毛高度与模型组相比增加44.21%(P0.05)。4.电镜结果显示,空白对照组空肠微绒毛丰富,排列整齐,柱状上皮细胞结构完整,细胞间连接结构正常。与空白对照组相比,动脉粥样硬化模型组紧密连接松弛,桥粒连接显示不清,微绒毛长度缩短了53.52%,差异具有显著性(P0.05);与模型组相比红曲组细胞间连接结构基本正常,微绒毛丰富微绒毛长度增长了47.62%,差异具有显著性(P0.05)。5.与空白对照组相比,动脉粥样硬化模型组occludin和JAM-1的蛋白表达均显著降低(P0.05);与模型组相比,红曲组occludin和JAM-1的蛋白表达均显著升高(P0.05)。6.动脉粥样硬化模型组TNF-α和IL-1β与空白对照组相比蛋白表达水平均显著升高(P0.05);红曲组与动脉粥样硬化模型组相比TNF-α和IL-1β蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。7.与对照组相比模型组厚壁菌门(Firmicutes)丰度显著增加(P0.05),红曲组中厚壁菌门数量较模型组显著减少(P0.05)。LEfSe分析显示拟杆菌属(Bacteroides)在红曲组中具有显著性差异。Spearman相关分析显示,Lachnospiracea_incertae_sedis菌属与斑块面积呈负相关;Anaeroplasma菌属与低密度脂蛋白胆固醇呈负相关;红曲组与模型组相比Anaeroplasma菌属菌群丰度显著升高;Alistipes菌属与总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇呈正相关;红曲干预后Alistipes菌属与模型组相比菌群丰度显著降低。结论:1.红曲有减轻动脉粥样硬化形成的作用,该作用可能与降低胆固醇,恢复肠道菌群平衡,保护肠道屏障功能,改善肠道炎症反应有关。2.红曲治疗特异性地改变了Alistipes菌属和Anaeroplasma菌属的丰度,提供了药物操纵肠道微生物群作为动脉粥样硬化治疗的可能性证据。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R543.5;TS201.4
【图文】：

动脉粥样硬化模型,红曲

图 1 小鼠主动脉大体油红 O 染色观察CK 空白对照组；AS 动脉粥样硬化模型组；RYR 红曲组图 2 红曲对小鼠主动脉斑块面积的影响空白对照组；AS 动脉粥样硬化模型组；RYR 红曲组照组相比，P＜0.05；**与空白对照组相比，P＜0.01；#动脉粥样硬##与动脉粥样硬化模型组组相比，P＜0.01。鼠血脂的影响对照组相比动脉粥样硬化模型组血清 TC 显著升高（P<0.0

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7图 2 红曲对小鼠主动脉斑块面积的影响白对照组；AS 动脉粥样硬化模型组；RYR 红曲组照组相比，P＜0.05；**与空白对照组相比，P＜0.01；#动脉粥样#与动脉粥样硬化模型组组相比，P＜0.01。鼠血脂的影响照组相比动脉粥样硬化模型组血清 TC 显著升高（P<0.模型组相比血清 TC 显著降低（P<0.05）；动脉粥样硬对照组相比显著升高（P<0.05），红曲组与空白对照组.05），红曲组与动脉粥样硬化模型组相比 LDL-C 显著降低显著性差异。（图 3）

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图 3 红曲对小鼠血脂的影响CK 空白对照组；AS 动脉粥样硬化模型组；RYR 红曲组注：*与空白对照组相比，P＜0.05；**与空白对照组相比，P＜0.01；#动脉粥样硬化模型组组相比，P＜0.05；##与动脉粥样硬化模型组组相比，P＜0.01。CK 组 n=4;AS 组 n=4;RYR 组 n=6。3 红曲对小鼠空肠病理的影响HE 染色结果显示：空白对照组空肠黏膜无病理性改变，绒毛及腺体均完整；与空白对照组相比，动脉粥样硬化模型组肠黏膜上皮脱失，肠绒毛不清，黏膜充血，空肠绒毛高度与对照组相比降低 30.44%（P<0.05）；红曲干预后肠绒毛轻度脱失，黏膜基本正常，空肠绒毛高度与模型组相比增加 44.21%（P<0.05）。(图 4，图 5)

【参考文献】