miR-195通过调控Smad7表达影响急性Stanford A型主动脉夹层的发生的研究

发布时间：2020-08-18 18:45

【摘要】：目的:探究mi R-195和Smad7在急性Stanford A型主动脉夹层中的表达,以及二者之间的相互作用对急性Stanford A型夹层发生的影响及其临床意义。方法:选取12例术前经主动脉CTA及术中情况诊断为急性Stanford A型主动脉夹层患者为夹层组,12例术前经主动脉CTA及术中情况诊断为升主动脉瘤并接受Bentall手术、David手术或Wheat手术的患者为动脉瘤组,6例诊断冠心病并接受冠脉旁路移植术的患者为冠心病组。收集术中切除废弃及中国医科大学附属第一医院心脏外科标本库中的升主动脉壁组织,分别对其分别采取HE染色法、Masson染色法、免疫组化染色法、Wesern Blot法,比较三组主动脉壁组织形态学区别及TGF-β1、Smad7的表达。应用q RT-PCR分别检测三组主动脉壁组织中的mi R-195表达。应用mi R-195、NC、下调的mi R-195、NC分别转染人血管平滑肌细胞细胞株24h、48h后,镜下观察细胞生长情况,应用Wesern Blot检测转染后细胞中TGF-β1、Smad7的表达。结果:动脉瘤组及夹层组的组织中,主动脉中膜排列紊乱,组织疏松,呈结节状突入内膜,细胞基质多发黏液样变性;主动脉夹层组织中可见多发弹力纤维断裂,粘液样变性严重,炎性细胞浸润,胶原纤维增生显著;冠心病组组织中膜结构排列紧密,弹性纤维排列有序,无明显弹性纤维增生,肌纤维正常连续,主动脉机制无明显黏液样变性。TGF-β在动脉瘤组和夹层组组织中表达呈阳性,冠心病组低表达。Smad7在三组组织中均有表达,且冠心病组中明显高于动脉瘤组和夹层组。Western Blot半定量分析显示,夹层组TGF-β1表达明显高于冠心病组(P0.05),Smad7表达显著低于冠心病组(P0.05)。mi R-195在动脉瘤组及夹层组较冠心病组明显高表达(P0.05)。在体外细胞学实验中,经上调mi R-195感染的人血管平滑肌细胞中,TGF-β1表达较未感染和mimic NC组细胞明显增高,Smad7表达较未感染和mimic NC组细胞明显降低。但是,经下调mi R-195感染的人血管平滑肌细胞中,TGF-β1表达较未感染和mimic NC组细胞明显降低,并且较感染上调mi R-195的细胞明显降低;Smad7表达较未感染和mimic NC组细胞明显升高,并且较感染上调mi R-195的细胞明显降低。以上结果表明,在人血管平滑肌细胞中,TGF-β1的表达可能与mi R-195相关,具体表现为mi R-195促进TGF-β1的表达。同时,mi R-195抑制Smad7的表达,并通过下调mi R-195可以使Smad7过表达。结论:mi R-195可能通过抑制Smad7表达调控主动脉夹层的发生和发展。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R543.1
【图文】：

主动脉壁,冠心病,升主动脉,结构完整

中国医科大学硕士学位论文3 结果一、组织 HE 染色如图 1 所示，从三组组织标本病理切片看，主动脉夹层及主动脉瘤组织中，主动脉中膜排列紊乱，组织疏松，呈结节状突入内膜，并且细胞基质多发黏液样变性；主动脉夹层组织中可见多发弹力纤维断裂，粘液样变性严重，炎性细胞浸润；冠心病组组织中膜结构排列紧密，弹性纤维排列有序，无明显弹性纤维增生，主动脉机制无明显黏液样变性。对比可知从组织形态学看，主动脉夹层组及主动脉瘤组组织中膜原有组织结构破坏，弹性纤维形态及功能可能不足，由此可能影响了主动脉中层结构及功能的稳定性，导致主动脉血管壁弹性及强度降低，耐受血流冲击的强度及剪切力能力降低，从而容易导致主动脉夹层的形成。

冠心病,升主动脉,结构完整,胶原纤维

响了主动脉中层结构及功能的稳定性，导致主动脉血管壁弹性及强度降低，耐受血流冲击的强度及剪切力能力降低，从而容易导致主动脉夹层的形成。图 1，升主动脉壁组织 HE 染色 200 倍（冠心病组：主动脉壁结构完整，中层细胞排列紧密、有序，细胞形态完整；动脉瘤组和夹层组：中层细胞排列紊乱，组织疏松，呈结节状突入内膜，基质多发黏液样变性）二、 Masson 三色染色法如图 2 所示，从三组组织标本切片看，主动脉夹层组合主动脉瘤组中胶原纤维增生明显；而冠心病组胶原纤维未见明显增生，肌纤维正常连续。

冠心病,动脉瘤,夹层,免疫组化染色

中国医科大学硕士学位论文维缺乏连续性，机制多发黏液样变性）三、免疫组织化学法检测蛋白表达应用 ImagePro Plus 6.0 分析软件，200 倍视野下每个标本随机选取 3 个视野，对阳性区域进行分析，TGF-β1、Smad7 在免疫组化切片中以棕黄色为阳性表达。统计各视野中 TGF-β1、Smad7 的阳性表达，计算光密度，并经 SPSS 统计可得：冠心病组TGF-β1的阳性表达平均光密度为13.77±3.84(与其余两组比较P＜0.01），动脉瘤组为 30.71±9.09（与夹层组对比 P＞0.05），夹层组为 29.33±8.18。冠心病组 Smad7 的阳性表达率为 15.30±6.91（与其余两组比较 P 小于 0.01），动脉瘤组 6.43±2.15（与夹层组比较 P 大于 0.05），夹层组为 2.73±0.72。组间差异经 SPSS 检验，应用单因素方差分析，以 P<0.05 为标准，实验结果的组间差异有统计学意义。TGF-β1 在动脉瘤组及夹层组组织中呈现高表达，而在冠心病组中呈现低表达。Smad7 在冠心病组中相对于动脉瘤组及夹层组表达增高。

【参考文献】