卡维地洛通过AMPK信号通路对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

发布时间：2020-10-14 07:43

　　 目的:心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是目前临床治疗的难点,本研究通过用卡维地洛治疗左冠状动脉闭塞和再灌注小鼠模型的方法,验证了卡维地洛特异性通过AMPK信号传导对心脏的保护作用,为临床冠心病治疗研究提供理论指导。方法:运用小鼠心肌缺血再灌注模型研究卡维地洛对心肌的保护作用。通过离体心脏测量卡维地洛在缺血再灌注损伤时对心脏代谢的影响。测量分离心肌细胞对缺血应激的收缩功能和细胞内Ca2+特性,通过细胞内钙信号水平观察,研究卡维地洛影响心肌细胞收缩力的机制。结果:我们发现,在结扎小鼠左冠状动脉和再灌注模型中,用卡维地洛治疗的小鼠在缺血再灌注条件下能显著保护心肌细胞,减少梗塞面积,改变能量代谢,增加氧利用率,并能改善心脏收缩功能。然而,卡维地洛治疗在缺乏AMPK活性的细胞或组织中无明显作用,所以验证了卡维地洛通过AMPK信号传导对心脏保护作用的特异性。用卡维地洛处理离体心脏使AMPK磷酸化,葡萄糖氧化增加40%,并且葡萄糖摄取增加30%(与对照相比p0.05)。卡维地洛的保护作用也在分离的小鼠心肌细胞中得到证实。本研究通过测量分离心肌细胞对缺血应激的收缩功能和细胞内Ca2+特性,发现卡维地洛治疗改善了缺氧诱导的最大收缩速率(+dL/dt)和最大舒张速率(-dL/dt),以及由缺氧引起的收缩幅度(PH)和收缩峰振幅(PS)的损害。此外,蛋白免疫印迹结果证实卡维地洛能在缺氧条件下激活AMPK。结论:卡维地洛能通过激活AMPK信号通路在心脏缺血性损伤中起到心肌保护作用。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R54
【部分图文】：

?＾ｖ＂?＾?；：??图２－１不同条件下的小鼠心脏超声图??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｂａｓａｌ?ａｎｄ?Ｉ／Ｒ?ｇｒｏｕｐ?ｗｉｔｈ?ｏｒ?ｗｉｔｈｏｕ?ＣＡＲ?ａｎｄ??ｃｏｍｐｏａｎ?Ｃ?ｔｒｅａｔｍｅｎ??ａ?ｂ??ｇ??＾?ｉ—ｉ?Ｓｔｅｍ?麵＾？？?Ｇ？?５〇?Ｉ?Ｉ?Ｓｔｅｍ?Ｗｔ?ｉ／；Ｒ??Ｘ?ＢＢ１?，?ｇ?４０－?－ｐ?了?＃??ｆｃ?ｒ＾ｒ＾ｉ?土?Ｉ?Ｐｉｒ＾?＾??喔?ｉｌｌ?ｍＭ??ＳＴ?ｕ：??图２－２不同条件下的小鼠心脏射血分数（Ａ）和左室短轴缩短率（Ｂ）（＊ｐ＜０．?０５?ｖｓ．?Ｓｈａｍ；??＃ｐ〈０．０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ?Ｉ／Ｒ；?ｔｐ〈〇．〇５ｖｓ．?ＣＡＲ?Ｉ／Ｒ）??Ｆｉｇ．２－２?ｔｈｅ?ｌｅｆｔ?ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ?ｅｊｅｃｔｉｏｎ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?（ＥＦ）?（Ａ）ａｎｄ?ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ?ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ?（ＦＳ）（Ｂ）??（＊ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ｓｈａｍ?；?＃ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ?Ｉ／Ｒ；?ｔｐ＜〇?〇５?ｖｓ．ＣＡＲ?Ｉ／Ｒ）??２．３讨论??Ｄｏｒｓｏｍｏｒｐｈｉｎ?（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ）是一种有效的，可逆选择性ＡＭＰＫ抑制剂，它能??够抑制ＡＭＰＫ的磷酸化。正常小鼠单纯使用Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ时，心功能无明显改变。??在缺血再灌注条件下，ＣＡＲ处理后的小鼠心功能明显提高，但在Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ抑??制ＡＭＰＫ活性的环境下，ＣＡＲ的这种心功能保护作用消失。通过本次实验，我们??可以观察到

，，用缝线将主动脉结扎悬挂在注射针头，注射器吸取５ｍＬ冰ＰＢＳ通心脏的血完全冲洗干净。??（３）将心脏置于０．１％的２，?３，?５－三苯基四氮唑（ＴＴＣ）溶液中，并放中。??（４）?１５ｍｉｎ后将心脏取出并用８＿０缝线在原来的冠脉结扎处再次结用注射器吸取５０ＩＵ的１％的伊文思蓝染料（Ｅｖａｎｓ?Ｂｌｕｅ）通过主动脉脏。??（５）?２ｍｉｎ后将心房心耳剪掉，并将１．５％石膏注入左右心室。最后入１０％福尔马林中浸泡固定。??（６）?２天后切片（每片厚度为１－２圆）并用显微镜拍照，并用Ｉｍａｇｅ。红色区域代表缺血但活着的心肌组织；白色区域代表梗死区；蓝危险区。??结果??由心脏切片染色情况可以看出（图３－１），不同处理组间的梗死面四组间的缺血危险区的比率相似，表明它们的缺血应激程度相等（图给药组的心肌梗塞显着减少，然而加用Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ后减弱了?ＣＡＲ，表明ＣＡＲ减少心肌梗死损伤部分是通过ＡＭＰＫ信号通路（图３－３）。??

ａｊ＊?ｗＳｍ?＾??ａ?．１?ｉ?Ｂ１??图３－３不同条件下的小鼠心脏梗死面积的比率（＊ｐ〈０．?０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ；?＃ｐ〈０．?０５?ｖｓ．??ＣＡＲ）??Ｆｉｇ．３－３?Ｔｈｅ?ｒａｔｉｏ?ｏｆ?ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ?ａｒｅａ（ＩＮＦ）?ｔｏ?ＡＡＲ?（＊ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ；?＃ｐ＜０．０５?ｖｓ．?ＣＡＲ）??３．?３讨论??本研宄用Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ－ＴＴＴＣ双染法测定小鼠缺血再灌注模型的心肌缺血区域??和梗死区域面积。ＴＩＣ因能和正常心肌细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成??红色化合物，从而使发生梗死的区域染成红色，而发生梗死的心肌细胞呈白色??［６５］。小鼠再灌注２４ｈ后，迅速取出心脏，并用冰的ＰＢＳ洗去心脏内血液，再用??缝线将之前建模时冠状动脉左前降支的结扎部位再次结扎，后将心脏置于ＴＴＣ??溶液中染１５ｍｉｎ，可将缺血心肌组织中未坏死部位染成红色，而坏死部位不被染??色而呈白色。Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ是一种蓝色染料，可将没有活性的细胞染成蓝色，心脏??取出后将冠状动脉左前降支的结扎部位再次结扎并用ＴＴＣ染色，将Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ??从主动脉逆灌入心室后
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本文编号：2840389