梗死心肌移植骨髓间充质细胞后单核细胞表型转化的研究

发布时间：2020-10-16 11:48

　　 目的:NR4A1对修复性Ly6C~(low)单核细胞的发育至关重要,有利于单核细胞/巨噬细胞发挥抗炎作用,探讨急性心肌梗死(AMI)移植骨髓间充质干细胞(MSCs)后Ly6C~(high)单核细胞向Ly6C~(low)表型转化与Nr4a1的表达水平的相关性及对炎症及心肌重塑的作用。方法:将小鼠随机分成4组分别为假手术组、AMI组、AMI+CCR2受体拮抗剂组及AMI+CCR2受体拮抗剂+MSCs组。CCR2受体拮抗剂RS504393经腹腔注射,MSCs由小鼠骨髓中提取培养原代骨髓间充质干细胞,体外传代纯化培养至第四代,显微镜进行形态学鉴定及流式鉴定后,在心肌梗死部位多点注射。72h后收集4组小鼠血液、脾脏单核细胞,分别流式细胞术检测Ly6C~(high)单核细胞、Ly6C~(low)单核细胞比例,Real-time PCR法、Western blot法检测血液Nr4a1表达水平。结果:骨髓间质干细胞培养纯化至第四代,形态单一,呈梭形,流式细胞仪鉴别检测显示:Sca-1表达阳性,CD45阴性,符合BM-MSCs表型特征。通过流式细胞术检测,AMI组外周血、脾脏中Ly6C~(high)单核细胞和Ly6C~(low)单核细胞比例,与假手术组相比均有增加;AMI+CCR2受体拮抗剂组外周血、脾脏中Ly6C~(high)单核细胞和Ly6C~(low)单核细胞比例与AMI组相比显著降低;AMI+CCR2受体拮抗剂+MSCs组外周血、脾脏,Ly6C~(high)单核细胞比例较AMI+CCR2受体拮抗剂组比例降低,Ly6C~(low)单核细胞比例与AMI+CCR2受体拮抗剂组相比增加(P0.001)。PCR与Western blot结果显示,AMI组Nr4a1表达水平与假手术组相比明显升高,AMI+CCR2受体拮抗剂组较AMI组降低,AMI+CCR2受体拮抗剂+MSCs组Nr4a1表达水平高于AMI+CCR2受体拮抗剂组(P0.05)。结论:AMI小鼠在梗死心肌移植MSCs后,Nr4a1的表达增强,Ly6C~(high)单核细胞向Ly6C~(low)单核细胞转化,Nr4a1的表达与Ly6C~(high)单核细胞向Ly6C~(low)单核细胞转化有关。
【学位单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R542.22
【部分图文】：

细胞培养纯化至第四代，形态单一，呈梭形。本实验室有相关研究基础，已成熟掌握骨髓间质干细胞培养技术。流式细胞仪鉴别检测显示:Sca-1表达阳性，CD45阴性，符合 BM-MSCs表型特征（图1）。图1 小鼠骨髓间充质干细胞的形态与鉴定Fig 1 The morphology and identification of bone marrow mesenchymal stem cells1.2 心肌梗死、CCR2受体拮抗剂、移植MSCs对小鼠孤核受体NR4A1表达水平的影响通过PCR检测，本研究发现与假手术组相比，AMI组NR4A1 mRNA水平显著升高，AMI＋CCR2受体拮抗剂组NR4A1 mRNA水平较AMI组明显减低，移植MSCs后的AMI＋CCR2受体拮抗剂＋MSCs组NR4A1 mRNA水平又有所升高，且接近AMI组水平，组间差异有统计学意义（P<0.05）。（图2A）通过Western blot检测，本研究发现NR4A1表达水平与PCR检测结果相似，AMI组NR4A1表达明显高于假手术组
【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 黄洁;盛祖龙;姚玉宇;;调节移植干细胞功能促进梗死心肌修复的策略[J];东南大学学报(医学版);2014年03期

2 黎叶飞;盛祖龙;姚玉宇;马根山;;两种骨髓间充质干细胞移植途径治疗急性心肌梗死的比较研究[J];东南大学学报(医学版);2011年05期

3 朱洪生,连锋,朱伟,钟竑,郑林,朱平;骨髓间质干细胞体外转化为心肌细胞的实验研究[J];上海第二医科大学学报;2002年05期

本文编号：2843216