缺血预适应通过Drp1介导的线粒体自噬拯救缺血再灌注心肌的自噬清除

发布时间：2020-10-24 05:21

　　 背景缺血性心脏病是严重威胁人类健康的重要心血管疾病之一。我们前期的研究显示自噬在缺血预适应的心肌保护作用中发挥重要作用。但是缺血再灌注会因为诱发过度自噬而导致缺血再灌注损伤。缺血预适应这种短暂和轻微的氧化应激如何避免自噬性细胞死亡从而发挥心肌保护作用,目前还不是很清楚。我们的研究拟通过细胞和动物实验探讨缺血预适应是否通过动力相关蛋白1介导的线粒体自噬拯救缺血再灌注心肌的自噬清除。方法在细胞试验中,H9C2心肌细胞成功转染线粒体基质靶向标记mito Ds Red(红色)和自噬溶酶体标记CD63-GFP(绿色)后,我们应用H2O2培养基构建构建H9C2心肌细胞短暂轻微的氧化应激模型,应用营养饥饿培养基(HBSS)构建H9C2心肌细胞非选择性自噬模型,(1)检测不同环境下ROS水平;(2)用激光共聚焦显微镜观察线粒体形态及线粒体与自噬溶酶体的共定位;(3)用电子显微镜观察细胞的超微结构。然后用DRP1-si RNA沉默H9C2心肌细胞的DRP1表达,再次经过上述H2O2和HBSS培养基处理,以Western blot analysis检测细胞自噬底物蛋白水平。在离体动物实验中,我们应用Langendorff-Perfusion动物模型,观察Mi RNA499抑制DRP1去磷酸化对缺血再灌注心肌细胞自噬的影响。结果细胞实验表明,H202可以使ROS适度升高,从而诱发线粒体自噬而不触发非选择性自噬。饥饿环境下可以同时诱导线粒体自噬和非选择性自噬,而敲除DRP1的表达时,线粒体自噬被抑制,非选择性自噬不受影响,说明DRP1介导了线粒体自噬过程。动物实验表明Mi R499可以通过抑制DRP1的激活,减少IPC心肌的线粒体自噬水平,说明IPC是通过DRP1介导的线粒体自噬发挥作用的。结论适度升高的活性氧可以独立诱导线粒体自噬,而不诱导非选择性自噬。IPC通过Drp1介导的线粒体自噬减轻氧化应激和挽救缺血再灌注心肌的自噬清除。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R54
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 绪言
2 实验研究
    2.1 实验材料
    2.2 实验装置
    2.3 实验方法
3 实验结果
    3.1 ROS 流式检测结果
    3.2 激光共聚焦和电子显微镜结果
    3.3 Western blot analysis
    3.4 Si RNA 转染心肌细胞 P62、 LC3Western blot analysis
    3.5 离体大鼠心肌各组 DRP1、P62、 LC3B 浓度水平及 Western blotanalysis
4 结果分析与结论
    4.1 结果分析
    4.2 讨论
致谢
参考文献
综述
    参考文献

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本文编号：2854072