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过表达Tbx3或Tbx18诱导人源iPS细胞向窦房结样细胞富集分化的可行性探索

发布时间:2020-12-01 20:19
  目的:在人源iPS细胞向心肌细胞定向分化的过程中,通过慢病毒感染过表达转录因子Tbx3或Tbx18,探索人源iPSCs(induced pluripotent stem cells,诱导多能干细胞)能否向窦房结样细胞富集分化。方法:1.人源iPS细胞的培养:使用Bio CISO人源iPS培养基培养iPS细胞(LHpb-Yaab C3),以1:41:7比例进行传代,复苏和传代时加入ROCK抑制剂减少细胞凋亡,提高克隆存活率。2.人源iPS细胞干性的检测:显微镜下观察稳定传代培养的细胞是否具备iPS细胞的典型特征。运用实时荧光定量PCR技术检测干性基因(Oct3/4、Sox2和Nanog)在iPS细胞中的表达水平。运用免疫荧光方法检测iPS细胞特异性标记物,细胞核转录因子(OCT4、NANOG)和细胞膜蛋白(SSEA4、TRA-1-60)的表达情况。3.人源iPS细胞向心肌细胞定向分化的诱导:细胞融合度接近100%时开始诱导分化,诱导分化当天使用RPMI+B27(-)无胰岛素培养基,并加入GSK3抑制剂CHIR(6μM),24小时后换成新鲜正常的RPMI+B27(-)... 

【文章来源】:西南医科大学四川省

【文章页数】:60 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

过表达Tbx3或Tbx18诱导人源iPS细胞向窦房结样细胞富集分化的可行性探索


显微镜下人源iPS细胞的形态

干性,标记物,实时荧光定量PCR,细胞


细胞的体积较小,细胞核大而明显,细胞质较少,核质比高,如图所示。图 1:显微镜下人源 iPS 细胞的形态。A:4×;B:20×。Fig1: Morphology of human iPS cells under microscope. A: 4×; B: 20×.1.2 实时荧光定量 PCR 检测人源 iPS 细胞干性标记物A B

荧光染色,合成图


图 3:免疫荧光显微镜下 iPS 特异细胞核转录因子 OCT4 和 NANOG 的染色结果。A1,B1:DAPI 核染色;A2:OCT4 荧光染色;B2:NANOG 荧光染色;A3,B3:Merge 合成图。Fig3: iPS specific nuclear transcription factor,OCT4 and NANOG was determined bymmunofluorescent method. A1, B1: DAPI nuclear staining; A2: OCT4 fluorescentstaining; B2: NANOG fluorescent staining; A3, B3: Merge diagram.SSEA4C1 C2 C3D1 D2 D3DAPISSEA4Merge


本文编号:2895023

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