线粒体氧化应激和稳态重构在糖尿病心房重构中的作用及吡格列酮的干预机制研究
发布时间：2020-12-04 11:00
目的:糖尿病导致心房颤动（房颤）发生的机制尚未完全阐明,我们的前期研究提示氧化应激和炎症在糖尿病心房重构中发挥重要作用,PPAR-γ激动剂吡格列酮通过抗氧化抗炎作用减缓糖尿病心房结构重构和电重构。线粒体是绝大多数哺乳动物机体内活性氧（ROS）的主要来源,本研究拟进一步评价线粒体氧化应激及稳态重构在糖尿病心房重构中的作用及吡格列酮的干预机制。方法:动物实验中将健康成年日本白兔随机分为正常对照组（C组）、糖尿病组（DM组）、糖尿病+吡格列酮药物治疗组（Pio组,4 mg/kg/天）。通过静脉注射四氧嘧啶建立兔1型糖尿病模型,模型建成8周后进行实验检测。通过心脏超声检测心脏结构和功能,通过HE染色测定左房肌细胞横截面积,通过马松染色测定左房间质纤维化程度,通过免疫组化和Western blot检测分析左房交感神经重构相关蛋白的分布和表达。检测各组家兔体表心电图及血流动力学变化,通过Langendofff灌流的离体心脏电生理实验评价心脏传导功能并评价房颤诱发率。通过共聚焦显微镜在1Hz场刺激下检测分离的兔心房肌细胞内钙瞬态（CaT）。应用电镜观察线粒体形态,并检测线粒体ROS生成速率、呼吸控制...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
动物模型建立及分组
天津医科大学博士学位论文10图 2.1 三组动物超声心动图样图2.1.4 血流动力学及体表心电图参数检测所有动物经 3%戊巴比妥钠充分麻醉后，使用绳索固定四肢及头部使其平卧于手术台，连接体表心电图记录 1 min，打开压力换能器并调零。随后剃去颈部体毛，使用手术剪沿颈部正中逐渐剪开皮肤及肌肉，过程中小心避让血管，充分暴露出气管后，用止血钳夹闭并向两侧分开气管周围肌肉，随后找到右侧颈总动脉，钝性分离出约 2 cm 长度，使用缝合线结扎远心端并用动脉夹夹闭近心端。随后，用小手术剪于游离的颈总动脉上剪开一小口，缓慢插入连接压力换能器的压力导管（提前充满 500 U/ml 肝素盐水的手术用腰麻管），使用缝线打一个活结结扎插入压力导管的血管壁，松开动脉夹测定动脉内压。待压力曲线稳定后，记录主动脉收缩压（SDP）、舒张压（DBP）和平均动脉压（MBP）。动脉内压记录完成后，缓慢向心室腔内推送压力导管，直至压力曲线呈现出正弦波样，提示导管末端已经过主动脉瓣进入左心室。待压力曲线稳定后，记录左室舒张末压（LVEDP）、左室压
图 2.2 血流动力学检测中压力导管由主动脉进入左心室过程2.1.5 心脏重量测量及组织标本留取完成血流动力学检测后，退出压力导管，结扎右侧颈总动脉。在留取动物血液样本后（见 1.1.4 血清标本留取及胰岛素检测），用手术剪经剑突沿胸骨正中剖开胸腔，迅速离断动静脉取出心脏，置入 4 ℃ PBS 溶液中充分洗净去除心腔内残留血液，用滤纸吸干后置于冰板上解剖心脏，去除多余组织，在电子天平上分别称量全心、心房和心室重量。心脏重量称取完毕后，取一小块左心房组织置于滴有 2.5%戊二醛固定液的载玻片上，用一次性石蜡刀片取 2 块约1×1×2mm 大小的长条形标本储存于 2.5%戊二醛中，避光保存，用于后续电镜检测。随后取部分左心房组织，固定于 4%的多聚甲醛中，用于后续病理学检查。最后取 2 块约 100 mg 的左心房组织置于 1.5 ml 组织冻存管内，立即放入-196 ℃液氮中使其迅速冷冻，取材完毕后放入-80 ℃冰箱冻存，用于后续分子生物学实验。2.1.6 病理学及免疫组织化学检查
【参考文献】：
期刊论文
[1]吡格列酮抑制心房肌细胞肿胀激活性氯电流通道重构的实验研究[J]. 宋芝萍,顾俊,胡伟,刘旭. 国际心血管病杂志. 2015(01)
[2]吡格列酮抑制糖尿病兔心房肌细胞离子通道重构[J]. 刘长乐,李广平,富华颖,李健,程立君,杨万松,刘彤. 中华急诊医学杂志. 2014 (02)
[3]吡格列酮对糖尿病兔心房重构的影响和机制研究[J]. 刘长乐,李广平,富华颖,李健,程立君,王兴华,杨万松,刘彤. 中华心律失常学杂志. 2013 (03)
本文编号：2897482
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：116 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
动物模型建立及分组
天津医科大学博士学位论文10图 2.1 三组动物超声心动图样图2.1.4 血流动力学及体表心电图参数检测所有动物经 3%戊巴比妥钠充分麻醉后，使用绳索固定四肢及头部使其平卧于手术台，连接体表心电图记录 1 min，打开压力换能器并调零。随后剃去颈部体毛，使用手术剪沿颈部正中逐渐剪开皮肤及肌肉，过程中小心避让血管，充分暴露出气管后，用止血钳夹闭并向两侧分开气管周围肌肉，随后找到右侧颈总动脉，钝性分离出约 2 cm 长度，使用缝合线结扎远心端并用动脉夹夹闭近心端。随后，用小手术剪于游离的颈总动脉上剪开一小口，缓慢插入连接压力换能器的压力导管（提前充满 500 U/ml 肝素盐水的手术用腰麻管），使用缝线打一个活结结扎插入压力导管的血管壁，松开动脉夹测定动脉内压。待压力曲线稳定后，记录主动脉收缩压（SDP）、舒张压（DBP）和平均动脉压（MBP）。动脉内压记录完成后，缓慢向心室腔内推送压力导管，直至压力曲线呈现出正弦波样，提示导管末端已经过主动脉瓣进入左心室。待压力曲线稳定后，记录左室舒张末压（LVEDP）、左室压
图 2.2 血流动力学检测中压力导管由主动脉进入左心室过程2.1.5 心脏重量测量及组织标本留取完成血流动力学检测后，退出压力导管，结扎右侧颈总动脉。在留取动物血液样本后（见 1.1.4 血清标本留取及胰岛素检测），用手术剪经剑突沿胸骨正中剖开胸腔，迅速离断动静脉取出心脏，置入 4 ℃ PBS 溶液中充分洗净去除心腔内残留血液，用滤纸吸干后置于冰板上解剖心脏，去除多余组织，在电子天平上分别称量全心、心房和心室重量。心脏重量称取完毕后，取一小块左心房组织置于滴有 2.5%戊二醛固定液的载玻片上，用一次性石蜡刀片取 2 块约1×1×2mm 大小的长条形标本储存于 2.5%戊二醛中，避光保存，用于后续电镜检测。随后取部分左心房组织，固定于 4%的多聚甲醛中，用于后续病理学检查。最后取 2 块约 100 mg 的左心房组织置于 1.5 ml 组织冻存管内，立即放入-196 ℃液氮中使其迅速冷冻，取材完毕后放入-80 ℃冰箱冻存，用于后续分子生物学实验。2.1.6 病理学及免疫组织化学检查
【参考文献】：
期刊论文
[1]吡格列酮抑制心房肌细胞肿胀激活性氯电流通道重构的实验研究[J]. 宋芝萍,顾俊,胡伟,刘旭. 国际心血管病杂志. 2015(01)
[2]吡格列酮抑制糖尿病兔心房肌细胞离子通道重构[J]. 刘长乐,李广平,富华颖,李健,程立君,杨万松,刘彤. 中华急诊医学杂志. 2014 (02)
[3]吡格列酮对糖尿病兔心房重构的影响和机制研究[J]. 刘长乐,李广平,富华颖,李健,程立君,王兴华,杨万松,刘彤. 中华心律失常学杂志. 2013 (03)
本文编号：2897482
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xxg/2897482.html
最近更新
教材专著
