CD137分子对小鼠血管钙化的影响

发布时间：2017-04-07 16:26

  本文关键词：CD137分子对小鼠血管钙化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨CD137分子对载脂蛋白E基因敲除小鼠(Apo E-/-小鼠)动脉粥样斑块及血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化的影响。方法本实验包括体内实验和体外实验两部分。(1)体内实验:Apo E-/-小鼠给予高脂饮食诱导动脉粥样硬化及钙化模型,分别用刺激型CD137抗体、抑制型CD137抗体激活或抑制CD137分子。对各组小鼠主动脉行组织形态学分析并予Masson染色及ALP染色,用Von kossa染色比较各组斑块钙化程度、免疫组化染色检测斑块中骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein 2,BMP-2)及Runx2蛋白表达水平。(2)体外实验:采用组织块贴壁法分离、培养C57BL/6J小鼠主动脉VSMCs,免疫荧光染色鉴定细胞纯度;用β-甘油磷酸钠诱导VSMCs钙化,以刺激型CD137抗体、抑制型CD137抗体激活或抑制CD137分子;细胞钙化及细胞内钙离子含量分别采用von kossa染色和甲基百里香酚蓝法检测,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组VSMCs骨形成相关蛋白BMP-2和Runx2m RNA的表达水平、蛋白印迹法(Western blot)检测BMP-2、Runx2蛋白表达水平。结果(1)各组内均可见小鼠主动脉内膜增厚及粥样斑块形成。给予刺激型CD137抗体激活CD137分子后,小鼠粥样斑块及钙化面积增加,血管壁肌纤维减少,斑块内见大量圆形或椭圆形、胞质嗜碱性的骨样细胞生成;而同时给予抑制型CD137抗体可部分逆转这种现象。(2)ALP染色结果显示,ALP在钙盐沉积部位活性较高,CD137刺激组斑块内ALP活性较对照组明显升高;而CD137抑制组斑块内ALP活性较刺激组下降。(3)免疫组织化学染色结果显示,对照组粥样斑块中BMP-2、Runx2表达较低;CD137刺激组BMP-2和Runx2的表达显著增加;而CD137抑制组BMP-2、Runx2的表达量与CD137刺激组相比有所下降。(4)组织块贴壁法分离、培养的小鼠VSMCs可见“谷峰样”生长;第3代细胞经免疫荧光鉴定其纯度达95%。(5)VSMCs经刺激型CD137抗体处理后,VSMCs的钙化较对照组而言明显加重;而经过额外的抑制型CD137抗体预处理后,刺激型CD137抗体的这种加强VSMCs钙化的作用被削弱。(6)CD137刺激组VSMCs钙含量和ALP活性较对照组增加(分别为P0.01,P0.05),而CD137抑制组VSMCs钙含量、ALP活性较刺激组均下降(分别为P0.01,P0.05)。(7)刺激型CD137抗体处理VSMCs后,细胞内BMP-2、Runx2的m RNA及蛋白表达水平较对照组升高;予抑制型CD137抗体预处理后,BMP-2、Runx2m RNA及蛋白表达水平较刺激组下降。结论(1)激活CD137能够促进Apo E-/-小鼠粥样斑块及VSMCs钙化;(2)CD137可参与调节VSMCs向骨样细胞表型转化。
【关键词】：CD137 血管钙化 血管平滑肌细胞 表型转化 动脉粥样硬化
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 常用缩略语中英文对照表12-14
• 第一章 绪论14-21
• 1.1 研究背景14-19
• 1.1.1 动脉粥样硬化的发生和发展14-15
• 1.1.2 血管钙化与动脉粥样硬化15-17
• 1.1.3 炎症在血管钙化形成中的作用17-18
• 1.1.4 CD137研究现状18-19
• 1.2 本研究的目的意义19
• 1.3 主要研究内容和技术路线19-21
• 1.3.1 研究内容19-20
• 1.3.2 技术路线图20-21
• 第二章 CD137对ApoE~(-/-)小鼠粥样斑块钙化的影响21-32
• 2.1 实验动物和材料21-22
• 2.1.1 实验动物及饲料21
• 2.1.2 实验试剂及其配制21-22
• 2.1.3 实验仪器22
• 2.2 实验方法22-26
• 2.2.1 实验动物饲养22
• 2.2.2 实验动物分组及处理22-23
• 2.2.3 组织收集与切片制备23-24
• 2.2.4 苏木精&伊红染色（H&E染色）24
• 2.2.5 Masson三色染色24
• 2.2.6 Von kossa染色24-25
• 2.2.7 ALP染色25
• 2.2.8 免疫组织化学染色25-26
• 2.3 统计学分析方法26
• 2.4 实验结果26-30
• 2.4.1 干预CD137后ApoE~(-/-)小鼠主动脉组织形态学变化26
• 2.4.2 干预CD137对ApoE~(-/-)小鼠主动脉粥样斑块钙化的影响26-27
• 2.4.3 干预CD137后ApoE~(-/-)小鼠主动脉管壁肌纤维分布变化27-28
• 2.4.4 干预CD137后ApoE~(-/-)小鼠主动脉ALP表达及分布28
• 2.4.5 干预CD137对ApoE~(-/-)小鼠主动脉BMP-2、Runx2表达的影响28-30
• 2.5 讨论30-32
• 第三章 CD137对小鼠血管平滑肌细胞钙化的影响32-47
• 3.1 材料32-34
• 3.1.1 实验动物32
• 3.1.2 试剂及耗材32-34
• 3.2 实验方法34-41
• 3.2.1 小鼠主动脉VSMCs分离、培养及鉴定34-35
• 3.2.2 细胞处理及分组35
• 3.2.3 Von kosssa染色35-36
• 3.2.4 细胞内钙离子含量定量测试36
• 3.2.5 VSMCs上清液碱性磷酸酶（ALP）活性测定36-37
• 3.2.6 RT-PCR检测目的基因mRNA表达水平37-39
• 3.2.7 细胞蛋白提取及免疫印迹（Western blot）39-41
• 3.3 统计学方法41-42
• 3.4 结果42-45
• 3.4.1 VSMCs鉴定42
• 3.4.2 干预CD137对VSMCs钙化的影响42-43
• 3.4.3 干预CD137对VSMCs钙含量及ALP活性的影响43
• 3.4.4 干预CD137对VSMCs骨形成相关基因表达的影响43-44
• 3.4.5 干预CD137对VSMCs骨形成相关蛋白表达的影响44-45
• 3.5 讨论45-47
• 第四章 结论47-48
• 参考文献48-52
• 综述52-66
• 参考文献61-66
• 致谢66-67
• 在学期间发表的学术论文67

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;血管钙化转化医学研究进展研讨会第一轮通知[J];中国病理生理杂志;2011年04期

2 ;血管钙化转化医学研究进展研讨会第二轮通知[J];生理科学进展;2011年03期

3 张晓敏;汤日宁;刘必成;;血管钙化相关抑制因子的研究进展[J];中华高血压杂志;2013年03期

4 邵文;李书国;;血管平滑肌细胞与血管钙化机制的研究进展[J];医学综述;2013年16期

5 江太发;;血管钙化也危险[J];山西老年;2011年02期

6 张宝红,杜军保;血管钙化的调节机制[J];心血管病学进展;2003年03期

7 杨英;血管钙化[J];内蒙古医学院学报;2004年02期

8 杨晓玲,曹军;血管钙化的分子机制[J];宁夏医学院学报;2005年04期

9 阙利亚;侯兰;刘梅莹;;终末期肾功能衰竭患者血管钙化发生事件分析[J];中国热带医学;2007年03期

10 张训;;血液透析患者血管钙化的防治[J];中国血液净化;2007年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王莉;丁涵露;;血管钙化与钙磷[A];中华医学会肾脏病学分会2010学术年会专题讲座汇编[C];2010年

2 齐永芬;唐朝枢;;血管钙化发病机制研究新进展[A];中华医学会第十三次全国心血管病学术会议专题报告专辑[C];2011年

3 张训;;慢性肾脏病病人的血管钙化[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会专题讲座[C];2006年

4 游怀舟;丁峰;杨海春;顾勇;林善锬;;尿毒症患者体内高级蛋白氧化产物对血管钙化的作用及其机制探讨[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

5 孙文学;刘毅;阮吉;徐玉兰;;雌激素对大鼠血管钙化消退影响的研究[A];2012年浙江省肾脏病学术年会论文集[C];2012年

6 刘毅;;慢性肾功能衰竭血管钙化防治研究进展[A];中华医学会第11届全国内科学术会议论文汇编[C];2007年

7 王中群;;尿毒症大鼠血管钙化的实验研究[A];中国微循环学会2011年全国学术会议论文汇编[C];2011年

8 李开龙;王燕;李柱宏;陈菁;林利容;李开斌;何娅妮;;他汀类药物对维持性血透患者血管钙化的影响[A];西南地区第12届肾脏病学术会议暨贵州省医学会肾脏病学分会2012年学术会议论文集[C];2012年

9 李开龙;何娅妮;王惠明;苏楠;詹俊;赵玲;陈林;;维持性血透患者外周血成纤维细胞生长因子23水平与血管钙化关系的研究[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年

10 江瑛;王梅;;高磷与慢性肾衰竭大鼠血管钙化的关系研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 鲁燕;脂联素在内质网应激致血管钙化过程中的作用及其机制[D];山西医科大学;2015年

2 游怀舟;高级蛋白氧化产物在血管钙化中的作用及其机制探讨[D];复旦大学;2007年

3 张萍;高磷和慢性炎症对血管平滑肌细胞钙化的影响及相关调节机制的研究[D];浙江大学;2004年

4 王宁宁;尿毒症患者血管钙化的组织学研究及相关分子机制的探讨[D];南京医科大学;2006年

5 刘立新;体外血管钙化与细胞增殖的关系及其氟伐他汀对钙化影响的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年

6 赵安菊;血管钙化相关因子在糖尿病鼠肾小动脉中的表达及其与血管内膜/中膜增厚关系的初步探讨[D];四川大学;2007年

7 张静;KLF5介导高磷诱导的Runx2表达和血管平滑肌细胞成骨样分化[D];河北医科大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘国栋;白藜芦醇抑制维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化的作用及机制研究[D];中国人民解放军医学院;2015年

2 靳晶晶;镁通过调节钙化相关因子的表达抑制血管钙化[D];河北医科大学;2015年

3 杨锐;硫化氢抑制内质网应激改善大鼠主动脉血管钙化[D];河北医科大学;2015年

4 孟芸;大鼠牙周炎与血管钙化关系的研究[D];青岛大学;2015年

5 徐燕;血液透析患者血清FGF-23水平与血管钙化的相关性研究[D];苏州大学;2015年

6 陈瑶;CD137分子对小鼠血管钙化的影响[D];江苏大学;2016年

7 张正杨;钾离子抗血管钙化的分子机制研究[D];川北医学院;2014年

8 闫铁昆;终末期肾病患者桡动脉局部醛固酮—盐皮质激素受体活性改变及其与血管钙化的关系[D];天津医科大学;2009年

9 陈晶晶;C-型利钠利尿肽抑制血管钙化的作用及机制研究[D];南华大学;2008年

10 李相;终末期肾脏疾病血管钙化多因素关联性分析[D];吉林大学;2012年

  本文关键词：CD137分子对小鼠血管钙化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：290867