CaN/NFAT3介导线粒体乙醛脱氢酶2对高糖诱导的心肌损伤保护作用及机制研究

发布时间：2020-12-21 23:05

　　目的:探讨CaN/NFAT3信号通路是否介导线粒体乙醛脱氢酶2对糖尿病大鼠心肌损伤保护作用及可能分子机制方法:无菌条件下取出生3天内SD大鼠乳鼠心脏,心尖部剪碎并用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ混合酶消化成单个细胞,经差速贴壁后并在培养液中加入5-Brdu进行原代培养,当其生长呈融合状态时对心室肌细胞进行处理。应用免疫荧光检测培养的乳鼠心肌细胞内α-SA蛋白以此鉴定原代培养心室肌细胞纯度;实验涉及如下分组:5.5mmol/L糖对照组（M）、30mmol/L高糖组（MH）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）组（MHA）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2抑制剂（Daidzin）组（MHD）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）和抑制剂（Daidzin）组（MHAD）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）和NFAT3抑制剂（11R-VIVIT）组（MHAV）;CCK8试剂盒测量NFAT3抑制剂最佳使用浓度;荧光探针检测细胞内钙离子浓度;ELISA测定细胞内CaN含量;免疫荧光检测细胞内CaNAβ含量;Western blot检测ALDH2、... 

【文章来源】：蚌埠医学院安徽省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同倍数下光镜观察原代培养心肌细胞

2 原代心肌细胞免疫荧光鉴定结果通过重复差速贴壁结合 5-Brdu 得到纯度较高的心肌细胞，并且通过对特异性达于心肌细胞和骨骼肌细胞中α-横纹肌肌动蛋白进行免疫荧光染色后，心肌-SA 抗原免疫荧光呈阳性反应，为绿色，位于细胞浆内，DAPI 细胞核染色为蓝，Merged 为α-SA 和 DAPI 合成结果，图 3。

图 3.心肌细胞免疫荧光鉴定（x100)Fig.3. Immunefluorescence identification of cardiomyocytes(x100).T3 抑制剂最佳使用浓度 NFAT3 特异性抑制剂 11R-VIVIT 后发现，细胞活性增强，且在依赖性；当抑制剂浓度达到 2um/L 时细胞活性达到最大值；再浓度随之出现细胞活性下降趋势；与 MH 组相比，MH+0 组、MH+2umol/L 11RVIVIT 组心肌细胞活性显著升高，见图 4

【参考文献】：
期刊论文
[1]高糖激活Ca2+-CaN-NFAT3信号通路致H9c2细胞肥大[J]. 徐小红,阮骆阳,田小华,潘凤娟,杨彩兰,柳国胜.  中国病理生理杂志. 2015(11)
[2]线粒体乙醛脱氢酶2在心肌缺血后处理中的作用[J]. 高琴,姜翠荣,于影,胡杰,李正红,关宿东.  中国药理学通报. 2010(08)
[3]钒酸盐纠正了糖尿病大鼠心肌组织内活化的DAG-PKC信息传导[J]. 梁自文,张忠辉,罗南渝,张平.  中国糖尿病杂志. 1999(04)



本文编号：2930671