Islet-1促C3H10T1/2向心肌细胞分化过程中电生理特性研究

发布时间：2020-12-24 13:58

　　目的用Islet-1慢病毒表达载体转染C3H10T1/2细胞,使其高表达Islet-1,特异性诱导C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞,通过检测诱导后各组细胞钠钾钙离子通道编码基因以及细胞膜离子通道电流的表达情况,分析明确Islet-1可诱导C3H10T1/2分化为具有电生理功能的心肌样细胞。方法复苏并传代培养C3H10T1/2细胞,将生长状态良好的细胞按1×104/孔接种于24孔板内,待细胞融合至70%时加入慢病毒表达载体转染C3H10T1/2细胞,荧光显微镜观察转染慢病毒后细胞绿色荧光蛋白表达以及细胞形态变化,流式细胞术检测慢病毒转染效率,并用western blot检测转染慢病毒后Islet-1表达情况；差速贴壁法分离培养新生小鼠心肌细胞,细胞免疫荧光法鉴定心肌细胞纯度；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞钠钾钙离子通道编码基因表达水平,并采用全细胞膜片钳技术检测细胞膜钠钾钙离子通道电流的表达,与空白对照组（未处理的C3H10T1/2细胞）,阴性对照组（转染空慢病毒载体组）,以及阳性对照组（新生小鼠心肌细胞）进行比较。结果1.转染慢病毒后96h,荧光显微镜可见细胞己... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．１．２巧病毒惠染效牟??Ａ：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｇｒｏｕｐ；?Ｂ：?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ??

２．５细舱免疫巧光法鉴定私肌细胞??细胞免疫巧光检测ｃＴｎＴ和ＣＸ４３蛋白对屯、肌细胞进行鉴定，ｃＴｎＴ阳性的细??胞呈强红色英光（图２．５?Ａ），ＣＸ４３阳性细胞呈强绿色英光（图２．５?Ｂ）。可见９０％??Ｗ上细胞可表达ｃＴｎＴ和ＣＸ４３，纯度较高。??２２??

图２．５新生小魚

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2935773