整合素β3在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中的作用研究

发布时间：2021-01-03 10:33

　　研究目的:细胞凋亡在缺血性心脏病的发生发展中发挥着非常重要的作用,心肌细胞凋亡是导致心梗后心衰和预后的重要因素。整合素β3在心肌细胞增殖和凋亡的双向调控中发挥重要作用,但其在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中作用不清,有待进一步阐明,本研究通过探索整合素β3在缺氧诱导的心肌细胞凋亡中的作用,为今后的心肌细胞凋亡干预治疗提供新的有效的靶点。研究方法:用氯化钴（Co Cl2）或缺氧培养箱培养（1%O2）处理大鼠H9C2心肌细胞和大鼠原代心肌细胞,模拟心肌细胞缺氧微环境。采用Western blot和实时荧光PCR检测缺氧对心肌细胞内整合素β3蛋白质及m RNA表达的改变。TUNEL法及Annexin V流式细胞术检测心肌细胞凋亡。通过冠状动脉结扎复制大鼠急性心梗（AMI）模型,免疫组化法检测整合素β3和HIF1α的表达。研究结果:氯化钴（Co Cl2）或缺氧培养（1%O2）能诱导H9C2细胞缺氧微环境,缺氧可明显抑制H9C2心肌细胞增殖,具有时间和剂量依赖性。缺氧并诱导H9C2心肌细胞凋亡。低氧条件下心肌细胞中整合素β3和HIF1-α的表达上调。干扰整合素β3表达可诱导心肌细胞凋亡,并能促进缺氧诱导... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

缺氧抑制H9C2心肌细胞增殖并诱导细胞凋亡

上海交通大学硕士学位论文法和流式细胞术检测缺氧对心肌细胞凋亡的影响，TUNEL 结果显示，氯化钴（900μM）或低氧微环境（1％O ）处理 H9C2 心肌细胞 24 小时，H9C2 心肌细胞凋亡水平上升，与对照组相比具有统计学意义（p < 0.01，图 1D）。流式细胞术的结果也证实了这个结果（图 1E）。因此，这些结果表明，缺氧微环境均可以抑制心肌细胞增殖并诱导细胞凋亡。

detected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (B) Integrin β3 protein expredetected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (C) Integrin β3 mRNA expredetected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different times. (D) Integrin βexpression was detected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different time Integrin β3 mRNA expression was detected by real-time PCR in H9C2 cells subjected to a hypoxic microenviroO2) for different times. (F) Integrin β3 protein expression was detected by western blotting in H9C2 cells subjhypoxic microenvironment (1% O2) for different times. **P<0.01.3.3 缺氧微环境诱导大鼠原代心肌细胞凋亡并促进整合素 β3 表达为了进一步证实缺氧对心肌细胞整合素β3 表达的影响，我们分离、培养鼠原代心肌细胞。利用氯化钴诱导的化学性细胞缺氧模型分析缺氧对大鼠原细胞的影响。实验的结果显示，氯化钴同样也可以诱导原代心肌细胞整合素HIF1α的表达上调，具有明显的时间依赖性（图 3A）。TUNEL 实验结果也显心肌细胞凋亡率在化学性细胞缺氧微环境中显著增加，具有统计学意义（p < 3B）。因此，所以的这些结果说明缺氧诱导心肌细胞凋亡的过程中整合素β3 显著增加，提示整合素β3 在心肌细胞凋亡的过程中发挥重要的作用。


本文编号：2954828