S1P/S1P1信号通路在肥大心肌细胞缺血后适应中的作用及其机制
发布时间：2021-01-22 17:47
目的：分离培养原代乳鼠心肌细胞并诱导其肥大,以肥大的心肌细胞模拟建立缺血后适应模型,在此基础上添加药物干预检测S1P/S1P1信号通路在肥大心肌细胞缺血后适应中的作用。方法：分离培养原代乳鼠心肌细胞,并通过免疫荧光法对其纯度进行鉴定。用去甲肾上腺素（NE）诱导心肌细胞肥大,通过RT-PCR检测β-MHC和测量细胞表面积来验证心肌细胞肥大情况并确定NE最佳浓度。用三气培养箱缺氧、复氧模拟建立细胞缺血再灌注模型及缺血后适应模型,通过TUNEL法检测细胞形态学凋亡和AnnexinV-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率来确定模型的建立情况并以RT-PCR检测相关mRNA （S1P1）的表达。肥大心肌细胞在缺氧后适应基础上添加药物干预信号通路进行相关检测,根据添加药物分为5组：（1）空白组,（2）S1P组,（3）W-146+S1P组,（4） PD98059+S1P组,（5） LY-294002+S1P组。通过流式检测心肌细胞凋亡率、TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态、Western-blot检测凋亡蛋白及相关信号通路蛋白（t-ERK1/2、p-ERK1/2、t-Ak、p-Akt）表达。结果：（...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
h后心肌细胞形态(分别为x100,x200,x400倍)
而化组和ＩＰｏｓｔ组肥大必肌细胞中阳性着色细胞核呈绿色颗粒，细胞体??积缩小，有致密的染色质边集、断裂成核碎片等改变，且ＩＰｏｓｔ组肥大必肌细胞ＴＵＮＥＬ??染色阳性细胞要明显少于化组（图９）。流式细胞仪检测发现化组（２７．９０％±４．４９％）??和ＩＰｏｓｔ组肥大也肌细胞（１５．９０〇／〇±１．７７％）的调亡率明显高于Ｓｈａｍ姐肥大也肌细胞??（７．９７％±２．１８％），差异有统计学意义（ｆ＜０．０５），而ＩＰｏｓｔ组洞亡率要明显低于化??组（戶＜０．０５）。综合Ｗ上结果证明，缺氧后适应模型建立成功（图１０，１１）。??■?■■■??Ｓｈａｍ?ＩＲ?ＩＰｏｓｔ??图９?ＴＵＮ：ＥＬ染色镜下各绝赃大也肌绵胞调ｔ：情况??Ｆｉｇ．９?Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＴＵＮＥＬ?ｓｔａｉｎ??２２??
结果??１原代郭鼠也肌细胞的分离培养及鉴定??１．１也肌细胞存活率??台盼蓝染色后计数，共乂６个必肌细胞，１２个细胞染色阳性呈蓝色，其余未染??色，也肌细胞细胞存活率较高，为９７％左右。??１．２也肌细胞形态及搏动情况??倒置显微镜下可见刚分离出的也肌细胞呈圆形，大而透亮，悬浮于培养液中。４??ｈ后细胞开始贴壁生长，１２?ｈ后细胞基本贴壁，开始变形，伸展为梭形、棒状、星??状、Ｈ角形和多边形等形态，并且细胞核大且胞浆丰富，立体感明显，折光性强。??２４?ｈ后贴壁的单个也肌细胞开始出现自发性的搏动，细胞间搏动频率各有不同（图??１）。４化后也肌细胞伸出伪足，相互之间开始形成交联，细胞交联后搏动的频率同??步且明显加快（图２）。７化后必肌细胞开始聚集成簇，有菊形的细胞团形成，细胞??簇呈岛码样搏动（图３）。此方法分离培养的必肌细胞培养到第４、５ｄ细胞搏动率可??法到９〇％Ｗ上，说明也肌细胞的纯度高。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]原代乳鼠心肌细胞培养方法的改进[J]. 陶静,马依彤,李晓梅,陈邦党,杨毅宁,马翔,刘芬,陈小翠,盖敏涛. 中华心血管病杂志. 2014 (01)
[2]细胞外信号调节激酶1/2在心血管系统疾病中的作用[J]. 王璇,龚和禾. 医学综述. 2012(23)
[3]1-磷酸鞘氨醇受体[J]. 张智超,莫中成,刘行,张大棣,易光辉. 生命的化学. 2012(04)
[4]新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良[J]. 李博,吴慧颖,朴虎林,柳克祥. 中国实验诊断学. 2012(02)
[5]肥厚心肌左心室重构进展中生存信号通路表达的变化[J]. 杨毅宁,李晓梅,马依彤,陈邦党,刘芬,韩伟,高晓明. 中华高血压杂志. 2010(07)
[6]新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良[J]. 张琳,李东野,王志荣,夏勇,朱红,潘德峰,张卓琦,杨煜. 徐州医学院学报. 2008(05)
[7]乳鼠心肌细胞的培养[J]. 邸美仙,李应东. 中华中医药学刊. 2007(04)
[8]缺血后处理减轻大鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤的观察[J]. 彭龙云,马虹,何建桂,高修仁,张焰,何小洪,翟原生,张雪娇. 中华心血管病杂志. 2006(08)
[9]心肌细胞培养进展[J]. 杨瑞丰,潘伟. 中国心血管病研究杂志. 2005(08)
[10]新生大鼠心肌细胞的分离和培养[J]. 刘霞,王常勇. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2005(06)
硕士论文
[1]9型腺相关病毒介导CaMEK基因转染增强心肌细胞ERK1/2通路表达活性的研究[D]. 纪伟宁.新疆医科大学 2012
本文编号：2993652
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
h后心肌细胞形态(分别为x100,x200,x400倍)
而化组和ＩＰｏｓｔ组肥大必肌细胞中阳性着色细胞核呈绿色颗粒，细胞体??积缩小，有致密的染色质边集、断裂成核碎片等改变，且ＩＰｏｓｔ组肥大必肌细胞ＴＵＮＥＬ??染色阳性细胞要明显少于化组（图９）。流式细胞仪检测发现化组（２７．９０％±４．４９％）??和ＩＰｏｓｔ组肥大也肌细胞（１５．９０〇／〇±１．７７％）的调亡率明显高于Ｓｈａｍ姐肥大也肌细胞??（７．９７％±２．１８％），差异有统计学意义（ｆ＜０．０５），而ＩＰｏｓｔ组洞亡率要明显低于化??组（戶＜０．０５）。综合Ｗ上结果证明，缺氧后适应模型建立成功（图１０，１１）。??■?■■■??Ｓｈａｍ?ＩＲ?ＩＰｏｓｔ??图９?ＴＵＮ：ＥＬ染色镜下各绝赃大也肌绵胞调ｔ：情况??Ｆｉｇ．９?Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＴＵＮＥＬ?ｓｔａｉｎ??２２??
结果??１原代郭鼠也肌细胞的分离培养及鉴定??１．１也肌细胞存活率??台盼蓝染色后计数，共乂６个必肌细胞，１２个细胞染色阳性呈蓝色，其余未染??色，也肌细胞细胞存活率较高，为９７％左右。??１．２也肌细胞形态及搏动情况??倒置显微镜下可见刚分离出的也肌细胞呈圆形，大而透亮，悬浮于培养液中。４??ｈ后细胞开始贴壁生长，１２?ｈ后细胞基本贴壁，开始变形，伸展为梭形、棒状、星??状、Ｈ角形和多边形等形态，并且细胞核大且胞浆丰富，立体感明显，折光性强。??２４?ｈ后贴壁的单个也肌细胞开始出现自发性的搏动，细胞间搏动频率各有不同（图??１）。４化后也肌细胞伸出伪足，相互之间开始形成交联，细胞交联后搏动的频率同??步且明显加快（图２）。７化后必肌细胞开始聚集成簇，有菊形的细胞团形成，细胞??簇呈岛码样搏动（图３）。此方法分离培养的必肌细胞培养到第４、５ｄ细胞搏动率可??法到９〇％Ｗ上，说明也肌细胞的纯度高。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]原代乳鼠心肌细胞培养方法的改进[J]. 陶静,马依彤,李晓梅,陈邦党,杨毅宁,马翔,刘芬,陈小翠,盖敏涛. 中华心血管病杂志. 2014 (01)
[2]细胞外信号调节激酶1/2在心血管系统疾病中的作用[J]. 王璇,龚和禾. 医学综述. 2012(23)
[3]1-磷酸鞘氨醇受体[J]. 张智超,莫中成,刘行,张大棣,易光辉. 生命的化学. 2012(04)
[4]新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良[J]. 李博,吴慧颖,朴虎林,柳克祥. 中国实验诊断学. 2012(02)
[5]肥厚心肌左心室重构进展中生存信号通路表达的变化[J]. 杨毅宁,李晓梅,马依彤,陈邦党,刘芬,韩伟,高晓明. 中华高血压杂志. 2010(07)
[6]新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良[J]. 张琳,李东野,王志荣,夏勇,朱红,潘德峰,张卓琦,杨煜. 徐州医学院学报. 2008(05)
[7]乳鼠心肌细胞的培养[J]. 邸美仙,李应东. 中华中医药学刊. 2007(04)
[8]缺血后处理减轻大鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤的观察[J]. 彭龙云,马虹,何建桂,高修仁,张焰,何小洪,翟原生,张雪娇. 中华心血管病杂志. 2006(08)
[9]心肌细胞培养进展[J]. 杨瑞丰,潘伟. 中国心血管病研究杂志. 2005(08)
[10]新生大鼠心肌细胞的分离和培养[J]. 刘霞,王常勇. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2005(06)
硕士论文
[1]9型腺相关病毒介导CaMEK基因转染增强心肌细胞ERK1/2通路表达活性的研究[D]. 纪伟宁.新疆医科大学 2012
本文编号：2993652
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xxg/2993652.html
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