Islet-1促MSCs向心肌样细胞分化中甲基化/乙酰化交互作用机制研究

发布时间：2021-01-26 08:08

　　目的明确在Islet-1诱导的间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）向心肌样细胞分化过程中组蛋白甲基化/乙酰化和DNA甲基化修饰在调控心肌早期转录因子表达中的作用,鉴定出三种修饰参与调控这些因子的关键酶,并初步探明这些关键酶在调控心肌早期转录因子过程中交互作用的机制。为提高MSCs向心肌细胞的分化率以更好地应用于临床治疗心血管疾病打下重要的实验基础。方法1.染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation q PCR,Ch IP-q PCR）检测转染GATA4和Nkx2.5启动子区组蛋白乙酰化/甲基化水平,以及三种修饰的关键酶与这些区域的结合情况2.甲基化特异性PCR（Methylation-Specific PCR,MSP）用以初步检测GATA4和Nkx2.5启动子区的DNA甲基化水平3.亚硫酸盐测序（bisulfite sequencing PCR,BSP）对MSP中DNA甲基化水平变化明显的样本进行验证4.荧光定量PCR（fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR）检测GATA4和Nkx2.... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：89 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

1过表达Islet-1后GATA4和Nkx2.5启动子区组蛋白乙酰化/甲基化水平（与Blank组相比，*P<0.05）

P 检测 GATA4 和 Nkx2.5 启动子区甲基化水平；B：BSP 验证 GATA4 启动位点甲基化水平图 2.3.1.1 5-aza 处理后 GATA4 和 Nkx2.5 启动子区甲基化水平的变化情况P detect DNA methylation level of GATA4 and Nkx2.5 promoter; B: BSP veri

34A：ChIP-qPCR 检测 GATA4 和 Nkx2.5 启动子区组蛋白乙酰化/甲基化水平；B：let-1+5-aza 组和 LV-islet-1 组 GATA4 和 Nkx2.5 启动子区组蛋白乙酰化/甲基化水平C：FQ-PCR 检测 GATA4 和 Nkx2.5 表达水平(与 LV-islet-1 组相比，#P<0.05).2.1 5-aza 处理后 GATA4 和 Nkx2.5 启动子区组蛋白乙酰化/甲基化变化情况以及平的变化情况hIP-qPCR detect histone acetylation/methylation level in GATA4 and Nkx2.5 promistone acetylation/methylation level in GATA4 and Nkx2.5 promoter in LV-islet-1+p compared with LV-islet-1 group; C: FQ-PCR detect expression of GATA4 and N(#P<0.05, compared with LV-islet-1 group)

【参考文献】：
期刊论文
[1]Effects of DNA Methylation and Histone Modification on Differentiation-associated Gene Expression in ES,NIH3T3,and NIT-1[J]. 方爱平,张悦,李明岳,郭辉,余小舫,李富荣,胡泓.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2011(01)
[2]组蛋白去乙酰化酶（HDACs）的研究进展[J]. 夏靖,冯冰虹.  广东药学院学报. 2010(05)
[3]MSCs心肌样细胞分化过程中GCN5募集促分化相关蛋白的筛选[J]. 周娜,朱静,田杰,李娅莎,邓兵,张亚兰,智深深.  中国细胞生物学学报. 2010(01)



本文编号：3000770