人脐带间充质干细胞对气阴两虚型难治性免疫性血小板减少症患者B淋巴细胞分化及免疫功能的影响

发布时间：2021-01-27 20:30

　　目的：探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对气阴两虚型难治性免疫性血小板减少症（rITP）患者B淋巴细胞分化及免疫功能的影响。方法：按照患者纳入及分组标准,将rITP患者分为气阴两虚型组和非气阴两虚型组,健康供者为对照组；用酶消化法提取健康胎儿脐带间充质干细胞；MTT法测hUC-MSCs生长曲线；人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法提取健康供者及rITP患者外周血单个核细胞；流式标记CD44、CD31和CD19分别检测hUC-MSCs纯度和外周血B淋巴细胞数；ELISA法确定美洲商陆（PWM）刺激外周血B细胞分化为浆细胞分泌抗体所需的浓度、时间,hUC-MSCs和单核细胞共培养的比例,检测健康供者组、气阴两虚型组和非气阴两虚型组患者外周血B细胞分化为浆细胞分泌IgG、IgM的含量；通过EnVision免疫组化法测每组CD138标记的细胞阳性率确定Blimp-1蛋白表达程度。结果：（1）以酶消化法从健康胎儿脐带提取的贴壁细胞主要为间充质干细胞,其纯度为99.8%,人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心法提取的外周血单个核细胞中B细胞占6.9%。（2）PWM可刺激人外周血B细胞分化发育为... 

【文章来源】：浙江中医药大学浙江省

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
前言
一、材料与方法
    （一） 实验材料
        1. 实验试剂
        2. 主要实验仪器
        3. 人脐带间充质干细胞的提取及培养
    （二） 实验方法
        1. 患者纳入标准及分组
        2. 酶消化法提取间人脐带充质干细胞
        3. 流式细胞仪鉴定MSCs纯度（CD44,CD31）
        4. MTT法测Huc-MSCs生长曲线
        5. 人外周血淋巴细胞提取及共培养体系建立
        6. 流式细胞仪检测外周血B细胞数
        7. ELISA法检测上清液抗体分泌（IgM、IgG）
        8. EnVision免疫组化测细胞Blimp-1蛋白表达
    （三） 统计方法
二、结果
    （一） 流式测第三代脐带MSCs纯度和外周血B细胞数
    （二） MTT测脐带间充质干细胞生长曲线
    （三） B细胞分化为浆细胞分泌抗体与PWM浓度和作用时间相关
    （四） hUC-MSCs抑制抗体IgG、IgM的分泌
    （五） 脐带MSCs抑制Blimp蛋白的表达
三、分析与讨论
四、小结
结论
参考文献
附图
致谢
附：文献综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3003682