TFPIct32对巨噬细胞源性泡沫细胞迁移的影响及其机制的初步研究

发布时间：2021-01-30 23:31

　　背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,As）是动脉的慢性炎症过程,其特征是修饰的低密度脂蛋白在血管壁沉积,导致动脉粥样硬化斑块的形成。它是心绞痛、心肌梗塞等急性心血管事件的主要原因。尽管动脉粥样硬化的临床诊断和治疗取得很大进展,但斑块形成的复杂过程给有效的诊断和治疗带来了巨大的挑战。特异性的诊断方法及高效的治疗手段成为动脉粥样硬化的研究热点。大量研究表明,巨噬细胞作为斑块中的重要成分,是影响斑块发展的重要调控靶点。巨噬细胞在吞噬大量修饰的低密度脂蛋白后转变为巨噬细胞源性泡沫细胞。泡沫细胞的迁移能力较低,大量滞留在内膜下,进而导致粥样斑块和坏死核心形成,炎症状态加剧,斑块持续发展。因此,促进泡沫细胞迁出有助于抑制斑块进展。组织因子途径抑制物（Tissue factor pathway inhibitor,TFPI）是组织因子介导的外源性凝血途径的生理性抑制剂。研究证实,TFPI对斑块发展的抑制作用与其下调血管内皮细胞活化、血管平滑肌细胞的增殖和迁移以及炎症因子的表达有关。研究显示,TFPIct32作为TFPI的C端肽段,具有类似TFPI抗动脉粥样硬化的作用,但是其具体作用机... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

泡沫细胞模型的鉴定

南华大学硕士学位论文20图4.2TFPIct32对Raw264.7鼠巨噬细胞存活率的影响（Mean±SD）A:不同浓度TFPIct32对细胞存活率的影响，vs0nM组,**P<0.01，n=3。B:TFPIct32作用不同时间对细胞存活率的影响，vs0h组，##P<0.01，n=3。4.3TFPIct32促进泡沫细胞的迁移巨噬细胞在斑块早期或者病变消退期间迁移，但在病变进展过程中会变成泡沫细胞，并且逐渐丧失迁移能力，滞留在斑块内。大量泡沫细胞的滞留促进斑块内脂质核心的形成，进而加剧炎症进展。采用Transwell和鬼笔环肽染色检测TFPIct32对泡沫细胞迁移能力的影响。Transwell实验结果显示：与对照组相比，12.5nM的TFPIct32作用Raw264.7巨噬细胞24小时后，穿过小室的细胞数量增加146.94%(P<0.01)；同等摩尔TFPIs作用后，其穿过小室的细胞数量与对照组相比，差异无显著性。细胞的的迁移运动与F-actin的聚合相关。当F-actin聚合受阻，不能形成有效的突触，会导致细胞运动能力下降。鬼笔环肽染色显示：与对照组相比，经TFPIct32处理后，泡沫细胞荧光强度增强49.05%(P<0.05)，泡沫细胞运动能力增强；TFPIs组与对照组相比，差异无显著性。上述实验结果表明，TFPIct32能够促进巨噬细胞源性泡沫细胞的迁移（图4.3）。AB

南华大学硕士学位论文22图4.3TFPIct32促进巨噬细胞源性泡沫细胞的迁移A：经氧化低密度脂蛋白预处理后，12.5nM的TFPIs与TFPIct32处理细胞24小时，Transwell实验检测穿过小室的细胞数量(如箭头所示)（×40）；B：为每个视野细胞数的统计分析图（Mean±SD），vsControl组，**P<0.01，n=3；C：经氧化低密度脂蛋白预处理后，12.5nM的TFPIs与TFPIct32处理细胞24小时，鬼笔环肽染色检测细胞荧光强度，如箭头所示，Scalebar=75μm；D：为荧光强度统计分析图（Mean±SD），vsControl组，*P<0.05，n=3。4.4TFPIct32促进泡沫细胞迁移的机制研究4.4.1TFPIct32上调泡沫细胞表面趋化因子受体CCR7的表达细胞的定向迁移受到细胞趋化因子的定向趋化作用和细胞膜上的趋化因子受体含量的调控。泡沫细胞受氧化低密度脂蛋白刺激后迁移能力下降，且其趋化因子受体CCR7的表达下调。趋化因子受体CCR7与其配体结合能诱导靶细胞细胞骨架重排及趋化性迁移。本实验组前期动物实验结果表明：小鼠主动脉组织和主动脉窦斑块中CCR7的表达上调。因此，综合文献报道与前期实验结果，推测TFPIct32对泡沫细胞迁移能力的促进与CCR7相关。首先进行TFPIct32处理的最佳浓度和时间的筛选，与之前筛选出来的浓度和时间一致。12.5nMTFPIct32处理24小时，通过qPCR和WB实验检测处理后CCR7的表达变化。结果显示：与对照组相比，TFPIct32处理组CCR7的mRNA和蛋白表达水平分别升高397.21%和72.28%(P<0.01)，TFPIs组与对照组之间无显著性差异（图4.4）。D

【参考文献】：
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本文编号：3009782