MiR-378a-5p调节血管平滑肌细胞增殖和迁移的机制研究
发布时间：2021-02-03 03:38
目的支架治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病是目前常用的方式,但植入支架引发血管壁损伤,内皮功能障碍,血管平滑肌细胞高度分化,血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cells）异常的增殖和迁移是导致动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）和支架再狭窄（In-stent stenosis,IRS）发生的重要因素;本研究旨在探究miR-378a-5p在调节血管平滑肌细胞功能的作用和分子机制。方法（1）载脂蛋白E缺失型小鼠（Apolipoprotein E,ApoE-/-）给予高脂喂养构建动脉粥样硬化模型组,健康基础饲料喂养的C57BL/6J小鼠构建对照组,获取两组小鼠的心脏血,应用荧光定量聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）测定两组中miR-378a-5p表达;（2）获取临床支架再狭窄患者和健康个体临床血样,应用RT-PCR测定两个组中miR-378a-5p的表达;（3）培养人血管平滑肌细胞,使用瞬时转染技术,lipo2000转染试剂将miR-378a-5p的过表达物及抑制物...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-378a-5p在PDGF-BB刺激下在对细胞迁移的影响
NC：转染了无关序列（Negative control，NC）组 miR-378a-5p：转染达物组 miR-378a-5p inhibitor：转染了 miR-378a-5p 抑制图 5 MiR-378a-5p 对血管平滑肌细胞表型转换蛋白的影3. MiR-378a-5p 作用机制探究3.1 预测 miRNA-378a-5p 的下游靶标 CDK1在 CDK1 的 3'UTR 中存在 miR-378a-5p 的潜在种子序列见图miR-378a-5p 的下游靶标，我们用生物信息学的方法预测了 miR有相互作用（http://www.targetscan.org/vert_72/），CDK1 可能是 miR中的作用靶标。
青岛大学硕士学位论文3.2 验证 CDK1 是 miR-378a-5p 的下游靶标查文献得到 P21 是已被证实的 CDK1 的作用靶标之一，为了明确 miR-378a-5p的作用通路，我们用 PDGF-BB 刺激细胞，通过 RT-PCR 检测发现转染了 miR-378a-5pmimic 的细胞 CDK1 的表达明显降低，见图 7A；在 PDGF-BB 刺激后，检测 CDK1mRNA 和蛋白表达水平及 p21 蛋白水平的表达，发现 miR-378a-5p mimic 转染的细胞中 CDK1 和 p21 的表达下降，而抑制了 miR-378a-5p 的表达后，CDK1 和 P21 的表达增加，见图 7B 和 7C；在免疫荧光实验中，荧光标记的细胞核（蓝色）和 CDK1（绿色）被共定位于细胞上，miR-378a-5p mimic 转染的 VSMC 中 CDK1 表达减低，而 miR-378a-5p inhibitor 组结果相反，荧光强度增强，见图 7D；RIP 实验示：表达miR-378a-5p 的质粒富集 CDK1 的效率比不表达 miR-378a-5p 组明显提高，见图 7E。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Treatment of coronary in-stent restenosis:a systematic review[J]. Leos Pleva,Pavel Kukla,Ota Hlinomaz. Journal of Geriatric Cardiology. 2018 (02)
[2]miRNA与动脉粥样硬化研究进展[J]. 张和细,龚辉. 中华实用诊断与治疗杂志. 2014(01)
博士论文
[1]富氢盐水通过失活Ras-ERK1/2-MEK1/2和Akt通路及抑制ROS减轻血管平滑肌细胞的增殖及大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的增生[D]. 陈亚丽.河北医科大学 2013
本文编号：3015843
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
miR-378a-5p在PDGF-BB刺激下在对细胞迁移的影响
NC：转染了无关序列（Negative control，NC）组 miR-378a-5p：转染达物组 miR-378a-5p inhibitor：转染了 miR-378a-5p 抑制图 5 MiR-378a-5p 对血管平滑肌细胞表型转换蛋白的影3. MiR-378a-5p 作用机制探究3.1 预测 miRNA-378a-5p 的下游靶标 CDK1在 CDK1 的 3'UTR 中存在 miR-378a-5p 的潜在种子序列见图miR-378a-5p 的下游靶标，我们用生物信息学的方法预测了 miR有相互作用（http://www.targetscan.org/vert_72/），CDK1 可能是 miR中的作用靶标。
青岛大学硕士学位论文3.2 验证 CDK1 是 miR-378a-5p 的下游靶标查文献得到 P21 是已被证实的 CDK1 的作用靶标之一，为了明确 miR-378a-5p的作用通路，我们用 PDGF-BB 刺激细胞，通过 RT-PCR 检测发现转染了 miR-378a-5pmimic 的细胞 CDK1 的表达明显降低，见图 7A；在 PDGF-BB 刺激后，检测 CDK1mRNA 和蛋白表达水平及 p21 蛋白水平的表达，发现 miR-378a-5p mimic 转染的细胞中 CDK1 和 p21 的表达下降，而抑制了 miR-378a-5p 的表达后，CDK1 和 P21 的表达增加，见图 7B 和 7C；在免疫荧光实验中，荧光标记的细胞核（蓝色）和 CDK1（绿色）被共定位于细胞上，miR-378a-5p mimic 转染的 VSMC 中 CDK1 表达减低，而 miR-378a-5p inhibitor 组结果相反，荧光强度增强，见图 7D；RIP 实验示：表达miR-378a-5p 的质粒富集 CDK1 的效率比不表达 miR-378a-5p 组明显提高，见图 7E。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Treatment of coronary in-stent restenosis:a systematic review[J]. Leos Pleva,Pavel Kukla,Ota Hlinomaz. Journal of Geriatric Cardiology. 2018 (02)
[2]miRNA与动脉粥样硬化研究进展[J]. 张和细,龚辉. 中华实用诊断与治疗杂志. 2014(01)
博士论文
[1]富氢盐水通过失活Ras-ERK1/2-MEK1/2和Akt通路及抑制ROS减轻血管平滑肌细胞的增殖及大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的增生[D]. 陈亚丽.河北医科大学 2013
本文编号：3015843
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