质子感知受体GPR4对内皮细胞炎症因子基因的表达调控作用

发布时间：2021-02-08 05:52

　　动脉粥样硬化的发生发展过程中,均有不同程度的炎症反应的发生,内皮细胞含有并释放促进组织损伤的炎症分子。在炎症环境下,由低氧环境发生的无氧糖酵解导致乳酸的积累,进而导致病变区域pH的降低,这预示着酸性环境对动脉硬化的发生可能有重要的作用；溶血磷脂酰胆碱（LPC）是磷脂酰胆碱的衍生物,由磷脂酶A2（PLA2）催化磷脂酰胆碱（PC）的水解生成,LPC是氧化性低密度脂蛋白ox-LDL的主要成分,因此LPC在动脉硬化部位是高浓度的。研究表明,内皮细胞中GPR4是一类重要的双配体受体,在酸性环境中有重要的作用,如促进粘附分子表达,炎症因子表达等。GPR4作为双配体受体在内皮细胞诱导炎症因子表达的调控作用的分子机理仍然不明。本研究首次阐述了质子感知受体GPR4在内皮细胞炎症因子表达过程中的一种新现象,这为能更好的理解动脉硬化的致病机理,为治疗动脉硬化也可能提供潜在靶点。目的：研究质子感知受体GPR4的活化对白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor, TNF-a）基因表达的调控作用及受体介导的信号通路,并探讨在动脉粥样硬化中的作... 

【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
英文缩略词表
一 引言
二 材料与方法
    2.1 主要仪器设备
    2.2 主要试剂及实验材料
    2.3 主要试剂的配制
    2.4 GPR4 cDNA的克隆与表达载体的构建
    2.5 人质子感知受体GPR4基因真核表达载体的构建
    2.6 GPR4基因干扰表达载体的筛选
    2.7 RT-PCR测定内皮细胞中四种质子感知受体mRNA表达
    2.8 过表达GPR4基因的HUVEC细胞及GPR4基因干扰的HUVEC细胞的建立
    2.9 LPC及酸性pH对GPR4诱导的炎症因子表达的检测
三 结果与分析
    3.1 人质子感知受体GPR4 cDNA的克隆与克隆载体构建
        3.1.1 人质子感知受体GPR4 cDNA的PCR扩增
        3.1.2 重组质粒pCR2.1-GPR4的双酶切鉴定
        3.1.3 重组质粒pCR2.1-GPR4的测序鉴定
    3.2 人质子感知受体GPR4基因真核表达载体的构建
        3.2.1 载体构建示意图
        3.2.2 重组表达载体pIRES-EGFP-GPR4双酶切鉴定
        3.2.3 重组质粒pIRES-EGFP-GPR4的测序鉴定
    3.3 HUVEC的形态生物学特征及生长曲线
        3.3.1 正常培养的HUVEC细胞图
        3.3.2 HUVEC细胞生长曲线的绘制
    3.4 HUVEC细胞中四种质子感知受体mRNA表达
    3.5 过表达GPR4基因的HUVEC细胞的建立
        3.5.1 显微荧光照相
        3.5.2 荧光定量PCR相对定量结果
    3.6 GPR4基因干扰的HUVEC细胞的建立
        3.6.1 GPR4干扰载体转染HUVEC显微荧光照相
        3.6.2 荧光定量PCR相对定量结果
    3.7 ELISA检测IL-6,TNF-α的表达
        3.7.1 IL-6标准曲线
        3.7.2 TNF-α标准曲线
        3.7.3 ELISA检测IL-6、TNF-α的表达
    3.8 PTX对pH6.8通过GPR4诱导的IL-6,TNF-α的表达没有影响
    3.9 NF-κB信号通路参与pH6.8通过GPR4诱导的IL-6,TNF-α的表达过程
四 讨论
五 结论
附录一
附录二
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文与参与的科研项目



本文编号：3023466