过表达GATA4小鼠骨髓间充质干细胞分泌的外泌体改善心梗心功能作用及机制

发布时间：2021-02-18 16:34

　　第一部分过表达GATA4小鼠骨髓间充质干细胞分泌外泌体改善心梗后心功能作用目的确定过表达GATA4小鼠骨髓间充质干细胞分泌的外泌体（exosome）体外向心肌细胞样分化的能力及抗凋亡能力,体内进一步验证体外结果。方法1、体外采用GATA4-BMSCs-exosome与BMSCs共同培养,空载体-BMSCs-exosome与BMSCs共同培养,BMSCs-exosome与BMSCs共同培养、BMSCs单独培养及小鼠心肌细胞（CMC）单独培养24小时、48小时、72小时后,首先定性的采用免疫荧光检测心肌特异性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin表达。并进一步采用RT-PCR的方法,定量检测心肌特异性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin表达。2、采用过表达GATA4-BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,空载体-BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养及心肌细胞用于低氧培养无血清培养诱导细胞凋亡作为阳性对照。同时准备正常条件下单独培养的心肌细胞作为阴性对照。将上述各组培... 

【文章来源】：昆明理工大学云南省

【文章页数】：131 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
绪论
第一部分 过表达GATA4小鼠骨髓间充质干细胞分泌的exosome改善心梗心功能的作用
    第一节 材料
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    第二节 方法
        2.1 Exosome的提取方法
        2.2 BCA检测exosome蛋白浓度
        2.3 ELISA检测exosome纯度
        2.4 电镜检测exosome形态
        2.5 Exosome与BMSCs共培养后免疫荧光染色检测
        2.6 Exosome与BMSCs共培养后RT-PCR检测心肌特异性分子
        2.7 采用流式细胞技术检测细胞的凋亡率
        2.8 Western-blot检测各凋亡因子的表达
        2.9 心脏彩超评估心梗心功能
        2.10 小动物活体成像评估心脏局部荧光强度
        2.11 番茄凝集素评估心脏血管密度
        2.12 Tunel技术评估心梗局部心肌细胞的凋亡数量
        2.13 免疫组化技术评估心梗心肌局部c-kit数量
    第三节 结果
        3.1 BCA检测结果
        3.2 ELISA检测结果
        3.3 Exosome电镜结果
        3.4 共培养后免疫荧光结果
        3.5 RT-PCR实验结果
        3.6 exosome抗凋亡结果
        3.7 Western-blot结果
        3.8 心脏彩超评估心梗心功能结果
        3.9 小动物活体成像结果
        3.10 番茄凝集素评估血管数量
        3.11 Tunel技术评估心梗部位心肌细胞凋亡数量
        3.12 免疫组化技术评估c-kit表达量结果
    第四节 讨论
第二部分 采用Agilent microRNA芯片检测过表达GATA4小髓间充质干细胞分泌exosome内有关细胞分化及抗凋亡的microRNA
    第一节 材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器设备
    第二节 方法
        2.1 Agilent miRNA芯片检测过程
    第三节 结果
        3.1 样本质检
        3.2 原始数据
        3.3 对原始数据行聚类分析
        3.4 对样品行两两比较差异miRNA分析结果
        3.5 散点图
        3.6 过表达GATA4-BMSCsexosome与空载体-BMSCsexosome差异microRNA对有关细胞分化及抗凋亡的microRNA统计
        3.7 根据差异microRNA完成GO分析
        3.8 根据microRNA对应的靶基因完成pathway分析
    第四节 讨论
第三部分 采用TMT标记定量蛋白质组学分析过表达GATA4小鼠骨髓间充质干细胞分泌exosome内有关细胞分化及抗凋亡蛋白
    第一节 材料
        1.1 主要试剂
        1.2 主要仪器
    第二节 方法
        2.1 样品制备
        2.2 基于液相色谱-质谱联用技术的定量蛋白质组学研究
        2.3 生物信息学分析
    第三节 结果
        3.1 技术路线
        3.2 实验结果总述
        3.3 定量数据总览
        3.4 重复性分析
        3.5 蛋白注释
        3.6 差异表达蛋白的功能分类
        3.7 差异表达蛋白的“分子功能”富集情况
        3.8 聚类分析
    第四节 讨论



本文编号：3039806