补体调节分子CD59和Crry在动脉粥样硬化中的作用和机制

发布时间：2021-02-20 18:20

　　目的动脉粥样硬化是一种严重危害人类健康的血管慢性炎症性病变。随着对动脉粥样硬化发病机制研究的不断深入,越来越多的证据表明固有免疫和适应性免疫均参与了该疾病的发生和发展。近年来的结果显示,补体系统在动脉粥样硬化的发展中发挥了重要的作用。补体系统是机体固有免疫反应中重要的一部分,有三条不同的活化通路（经典通路、MBL通路和替代通路）,分别通过不同的机制活化C3和C5转化酶,最终形成攻膜复合体（membrane attack complex, MAC）, MAC可在靶细胞上形成贯通细胞膜的通道,最终导致靶细胞的裂解。研究显示MAC除了具有裂解细胞的效应外,还有亚裂解作用,即,当细胞膜表面形成的MAC浓度较低而不足以裂解细胞的时候,可以活化细胞内一系列的信号通路诱导细胞释放炎性介质,影响内皮细胞和平滑肌细胞的功能,参与炎症反应和血栓形成等过程。机体为了保护自身细胞免受补体攻击,存在着多种补体调节蛋白,它们分别在不同阶段调节补体的活化,其中C3、C5转化酶及MAC是重要的调节节点。CD59是一种重要的膜结合型补体调节蛋白,主要功能是抑制MAC形成（图1）。本课题组及其他学者发现,在高脂饲料诱导的... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：130 页

【学位级别】：博士

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CATEGORY
中文摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 CD59在糖尿病诱导的动脉粥样硬化中的作用
    前言
        一、补体系统及其调控
        二、补体与动脉粥样硬化的关系
        三、研究目的
    材料
    方法
        一、糖尿病小鼠模型的建立
-/-/Apoe^-/-和Apoe^-/-小鼠的基因型鉴定">            （一） mCd59ab^-/-/Apoe^-/-和Apoe^-/-小鼠的基因型鉴定
            （二） STZ诱导的糖尿病动脉粥样硬化小鼠模型的建立
        二、检测CD59缺失对STZ诱导的糖尿病动脉粥样硬化的影响
            （一） 主动脉获得和切片制备
            （二） 主动脉油红O染色
            （三） 冰冻切片HE染色
            （四） 冰冻切片油红O染色
            （五） 冰冻切片免疫荧光染色检测MAC和巨噬细胞
            （六） 小鼠血清脂质检测
            （七） 数据统计分析方法
    结果
        一、STZ诱导的糖尿病动脉粥样硬化小鼠模型的建立
        二、CD59的缺失促进了糖尿病诱导的动脉粥样硬化的发展
        三、CD59的缺失促进了斑块局部MAC的沉积和巨噬细胞的浸润
    讨论
    小结
第二章 CR2靶向的补体抑制分子Crry对动脉粥样硬化的治疗作用
    前言
        一、CR2介导的靶向补体抑制剂
        二、研究目的
    材料
    方法
        一、CR2-Crry的制备纯化与标记
            （一） CR2-Crry的真核细胞表达及纯化
            （二） CR2-Crry的生物素标记
        二、CR2-Crry在动脉粥样硬化斑块局部的靶向性
        三、动脉粥样硬化小鼠模型的建立以及CR2-Crry的干预治疗
-/-/Apoe^-/-和Apoe^-/-小鼠的基因型鉴定">            （一） mCd59ab^-/-/Apoe^-/-和Apoe^-/-小鼠的基因型鉴定
            （二） CR2-Crry处理动脉粥样硬化小鼠
        四、动脉粥样硬化发展程度的检测分析
            （一） 主动脉获得和切片制备
            （二） 主动脉油红O染色
            （三） 冰冻切片HE染色及油红0染色
            （四） 冰冻切片免疫荧光染色检测C3、MAC、巨噬细胞和T细胞
            （五） 小鼠血清脂质检测
            （六） 数据统计分析方法
    结果
        一、CR2-Crry重组蛋白在真核细胞的表达及纯化
        二、系统应用CR2-Crry重组蛋白可靶向至动脉粥样硬化斑块的局部
        三、CR2-Crry治疗可以减缓动脉粥样硬化的发展
        四、CR2-Crry抑制斑块局部C3的活化、MAC的形成
        五、CR2-Crry抑制斑块局部炎性细胞浸润
    讨论
    小结
第三章 补体攻膜复合体促进动脉粥样硬化的机制研究
    前言
        一、攻膜复合体MAC的亚裂解作用
        二、泡沫细胞的形成
        三、研究目的
    材料
    方法
        一、细胞培养
            （一） 巨噬细胞培养
            （二） 内皮细胞培养
            （三） 细胞冻存
            （四） 细胞复苏
        二、补体攻膜复合体对巨噬细胞泡沫化的影响
            （一） MAC对巨噬细胞的亚裂解浓度
            （二） 亚裂解浓度MAC对巨噬细胞泡沫化的影响
            （三） 油红O染色
            （四） qRT-PCR
    结果
        一、亚裂解浓度MAC可促进ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化
        二、亚裂解浓度MAC增强的泡沫化不依赖于非受体介导的胞饮作用
        三、亚裂解浓度MAC可能通过上调清道夫受体CD36表达,抑制脂质转运分子ABCA1,ABCG1的表达促进泡沫细胞形成
        四、亚裂解浓度MAC促进巨噬细胞及内皮细胞炎性细胞因子和生长因子的表达
    讨论
    小结
附图表
参考文献
致谢
在读期间主要科研成果及获得荣誉
附件
附表


【参考文献】：
期刊论文
[1]The Complement System in Liver Diseases[J]. Xuebin Qin1, 3 and Bin Gao21Laboratory for Translational Research, Harvard Medical School, Cambridge, MA 02139, USA; 2Section on Liver Biology, Laboratory of Physiologic Studies, National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism, National Institutes of Health, Bethesda, MD 20892, USA;.  Cellular & Molecular Immunology. 2006(05)



本文编号：3043156