ITP患者来源的骨髓间充质细胞对巨核细胞生物学行为的影响

发布时间：2021-02-25 11:25

　　研究目的:以免疫性血小板减少症（Immune thrombocytopenia,ITP）患者及正常对照者（Normal control,NC）来源的骨髓间充质细胞（Bone marrow mesenchymal cells,BMCs）作为研究对象,构建巨核细胞体外分化模型及骨髓间充质细胞-巨核细胞体外共培养模型,旨在研究ITP患者来源的BMCs在体外生存、增殖和细胞因子表达等方面有无异常,以及对于巨核细胞分化及凋亡等生物学行为的影响,从而了解在ITP中BMCs所存在的缺陷及其对于血小板生成支持作用的改变,为完善ITP的发病机制以及相关针对性治疗提供新的方向。实验方法:骨髓样本分别取自7名ITP患者及5名正常对照者,全骨髓贴壁培养法培养得到BMCs;流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测细胞表面蛋白CD105、CD90、CD73、CD34、CD45、CD19、CD11b、HLA-DR的表达状况,进行表型鉴定;Cell counting Kit 8（CCK8）法检测细胞增殖,Annexin V/PI双染法检测细胞基础凋亡率,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及酶联免疫吸附... 

【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

体外培养的骨髓间充质基质细胞表型鉴定特征注：流式表面标记鉴定显示，ITP患者（n=5）及正常对照者（n=5）来源的体外培养的梭形贴壁生长细胞均符合骨髓间充质细胞表型鉴定标准，即高表达CD105、CD73、CD90（>90%）

ITP 患者（n=5)与正常对照（NC）（n=5)来源的 BMCs 体外增殖状况比较。①P=0.039，②P=0.00P=0.007，与正常对照相比。图 1-3 BMSCs 体外培养增殖及凋亡状况Fig1-3 Cell proliferation curve of BMSCs when cultured in virto4.ITP 患者来源的骨髓间充质细胞体外培养条件下细胞基础凋亡增加收集培养至第三代的细胞，FCM 法分别检测两组不同来源细胞的基础凋亡状况，结果（图 1-4）显示，ITP 患者（n=5)来源的细胞的基础凋亡率明显高于正常对照（n=5）。（NC vs ITP: AV+PI-, 2.19±0.41 % vs 3.1±0.69%, P< 0.0AV+PI+,4.2±0.99% vs 6.74±0.93%, P< 0.01; AV+PI+/-, 6.39±1.25 % vs 9.84±1.53%, P0.01）。表明 ITP 患者来源的 BMCs 体外生存能力下降。

35ITP 患者（n=5)与正常对照（NC）（n=5)来源的 BMCs 体外培养基础凋亡比较，结果显示 ITP来源的细胞早期凋亡、晚期凋亡以及细胞总的凋亡率均明显高于正常对照来源的细胞，①P=0.036，②P=0.003，③P=0.004，与正常对照相比。图 1-4 BMCs 外培养凋亡状况Fig1-4 Cell basal apoptosis rate of BMCs when cultured in virto4.ITP 患者来源的细胞部分与巨核系分化成熟相关的细胞因子表达缺陷在实验中，利用 RT-qPCR 检测 BMCs 内上述与巨核系分化成熟相关的细胞因子基因表达状况，结果(图 1-5A）显示，ITP（n=5)来源的 BMCs 中 IL-6 及 SCF的 mRNA 的表达量明显减少（均 P< 0.001），而 IL-11、TPO 的基因的表达量与

【参考文献】：
期刊论文
[1]Yin and Yang of mesenchymal stem cells and aplastic anemia[J]. Larisa Broglie,David Margolis,Jeffrey A Medin.  World Journal of Stem Cells. 2017(12)
[2]全骨髓贴壁法培养人骨髓间充质干细胞的改良研究[J]. 王晓庆,仲照东,陈智超,邹萍.  中国实验血液学杂志. 2014(02)
[3]骨髓间充质干细胞分离培养的研究进展[J]. 王运涛.  国外医学.生物医学工程分册. 2002(04)



本文编号：3050897