金丝桃素对凝血酶的抑制潜力与机制研究

发布时间：2021-02-25 22:25

　　背景心血管及血栓性疾病仍然是世界上发病与死亡的主要原因。在这些疾病中,凝血酶作为一种多功能的丝氨酸蛋白水解酶在凝血级联中发挥着关键作用,主要是将可溶的纤维蛋白原转化为难溶的纤维蛋白。目前,抑制凝血酶已经成为治疗心血管及血栓性疾病的一种有效策略。方法本文采用凝血酶特异性荧光探针Z-GGRAMC乙酸盐作为底物构建人凝血酶抑制剂体外筛选模型,在体外进行中药化合物高通量的筛选实验（52种）。试图从中发现抑制潜能较强的化合物,并选取抑制潜能最强的化合物（金丝桃素）,详细探究其抑制动力学及分子对接模拟机制。金丝桃素是圣约翰草的主要活性成分之一,为进一步分析探究其对人凝血酶的作用及其机制,收集了圣约翰草提取物及其来源的20种商业化主要活性成分,以黄芩素作为阳性对照。采用基于荧光的生物化学方法仔细研究了圣约翰草提取物及其主要天然成分对人凝血酶的抑制作用。结果体外初筛表明橙黄决明素等15种化合物可能具有凝血酶抑制潜力（抑制剂浓度为100μM时,凝血酶的残余活性低于50%）。对这15种化合物进行剂量-抑制曲线分析并比较,结果显示金丝桃素具有最强的人凝血酶抑制能力。以圣约翰草为模式的进一步结果表明,圣约翰草... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

与凝血酶孵育30min后Z-GGRAMC乙酸盐（50μM）的荧光强度随酶浓度的线性变化，激发为380nm

-GGRAMC 乙酸盐(50 μM)分别与凝血酶 (0.1 NIH/mL)孵育不同时间度随反应时间的线性变化。激发为 380 nm。力学分析及最佳底物浓度的确定 1.3 所示，先前优化实验已经保证本实验所采用的反应时间均在线性反应区间内。表观动力学常数 Vmax和 Km通过公式数据进行非线性拟合而成，并采用 Eadie-Hofstee (v-v/[S]C 乙酸盐代谢产物生成的动力学行为符合经典的米氏动力拟合求解动力学参数，求得 Vmax=25.93±1.23 μmol/min/NIH±15.63 uM。选择底物浓度接近 Km值，本试验选择底物浓

RAMC 乙酸盐(50 μM)分别与凝血酶 (0.1 NIH/mL)孵育不同时间后度随反应时间的线性变化。激发为 380 nm。学分析及最佳底物浓度的确定.3 所示，先前优化实验已经保证本实验所采用的反应时间以线性反应区间内。表观动力学常数 Vmax和 Km通过公式 1-据进行非线性拟合而成，并采用 Eadie-Hofstee (v-v/[S])作 乙酸盐代谢产物生成的动力学行为符合经典的米氏动力学求解动力学参数，求得 Vmax=25.93±1.23 μmol/min/NIH-T15.63 uM。选择底物浓度接近 Km值，本试验选择底物浓度


本文编号：3051670