MicroRNAs对血管内皮细胞衰老及血管功能影响的研究

发布时间：2021-03-09 15:34

　　研究背景及目的衰老是心血管疾病的独立危险因素,包括冠心病、高血压、中风。伴随着年龄的增加,机体内会发生很多年龄相关的功能和结构改变,其中内皮功能紊乱是动脉粥样硬化发生发展的起始阶段。但是血管细胞,尤其是内皮细胞,是如何出现衰老表型,衰老是如何影响血管功能并导致衰老相关的血管疾病,这一过程仍需要大量的研究。微小RNA （MicroRNAs, miRNAs）是一类小的非编码RNA,在调节内皮细胞衰老方面发挥重要调控作用。已知的芯片结果发现miR-216a/miR-18 1b在衰老的内皮细胞中表达上调,但其作用机制仍不清楚。研究方法1.原代培养人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）,建立HUVECs衰老模型。实时荧光定量PCR在PDL8及PDL44内皮细胞中检测miR-216a/miR-181b,比较其表达水平。2.通过病毒感染建立稳定高表达miR-216a的内皮细胞系,检测衰老相关的β半乳糖苷酶（Senescence Associated β-Galactosidase, SA-β-gal）活性、细胞周期蛋白表达水平... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图４．?ＨＵＶＥＣｓ衰老指标的检测

图４．?ＭｉＲ－２１６ａ诱导内皮细胞出现衰老表型。Ａ．?ＰＤＬ８，?ＰＤＬ１２，?ＰＤＬ１６，ＰＤＬ２０的??８八－｜３－３３１染色结果；８．高表达加民－２１６３的？〇１＾２０１１１；￥６〔５蓝染细胞比例较对照增??加６１％；?Ｃ随着传代次数的增加，蓝染细胞逐渐増多；Ｄ，Ｅ．在ＰＤＬ８和ＰＤＬ２０??ＨＵＶＥＣｓ中，ｐ５３，?ｐ２１表达量明显上调；Ｆ．在ＰＤＬ８和ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ中，细胞??端粒长度未见明显改变；Ｇ．在ＰＤＬ８和ＰＤＬ２０ＨＵＶＥＣＳ中，端巧酶活性分别下调??２３〇／〇，?１６％。＊尸＜０．０５，＊＊尸＜０．００１。〇＝３，结果用均数±标准差表示。ＮＣ，ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ。??４．?ＭｉＲ－２１６ａ调节内皮细胞功能??为了观察ｍｉＲ－２１６ａ对内皮细胞功能的影响，我们用ＭＴＳ比色法检测细胞增殖??功能、划伤实验检测细胞迁移功能、粘附实验检测细胞粘附功能。??４．１?ＭｉＲ－２１６ａ抑制ＨＵＶＥＣｓ的増殖功能??为了研巧ｍｉＲ－２１６ａ对肌ＶＥＣｓ增殖功能的影响，我们采用ＭＴＳ比色法检测??高表达?ｍＨｌ－２１６ａ?的?ＰＤＬ８?ＨＵＶＥＣｓ?和?ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ，?ｙｊ■及转染?ｍｉＲ－２１６ａ?抑制剂??的ＰＤＬ４４?ＨＵＶＥＣｓ的增殖能力。结果表明，ｍｉＲ－２１６ａ可抑制ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ增殖??

的ＰＤＬ４４?ＨＵＶＥＣｓ的增殖能力。结果表明，ｍｉＲ－２１６ａ可抑制ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ增殖??功能１５％ＣＰ＜０．００１），反之，抑制ＰＤＬ４４?ＨＵＶＥＣｓ中的ｍｉＲ－２１６ａ能够促进内皮细胞??增殖１２％（片０．０２７）。提示，过表达ｍｉＲ－２１６ａ可抑制内皮细胞的増殖功能（图５）。??３７??


本文编号：3073075