球状脂联素通过p38MAPK/NF-κB途径减轻缺氧/复氧诱导的新生大鼠心肌细胞程序性坏死

发布时间：2021-03-16 11:39

　　目的:程序性坏死,也称为坏死性凋亡,在心肌缺血/再灌注损伤（MIRI）中起重要作用。球状脂联素（gAd）是一种蛋白质激素,其调节许多代谢过程并在心血管稳态中起重要作用,包括在MIRI期间保护心肌细胞,但在缺氧/复氧条件下gAd对心肌细胞的保护机制仍不清楚。我们使用SD新生大鼠心室肌细胞（NRVMs）建立心肌缺氧/复氧模型,旨在研究gAd在缺氧/复氧诱导的细胞凋亡和坏死性凋亡中的作用方法:本实验将gAd（0,0.5,1和2μg/ml,24小时）预处理培养的SD新生大鼠心室肌细胞（NRVM）暴露于缺氧/复氧条件下,然后分别使用MTT和LDH测定分析细胞活力和LDH水平;使用TUNEL染色的方法来区分细胞凋亡和坏死之间的发生的情况及比例;Western Blot用于评估细胞凋亡和程序性坏死相关蛋白的的表达水平（包括caspase3,RIP1,RIP3,p38/MAPK,NF-κB,Bcl-2和Bax等蛋白）。根据免疫荧光法来检测活性氧（ROS）水平,然后分别通过丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒来检测其活性,从而评估氧化应激。结果:1.gAd通过增加细胞活力和细胞数量,减少LD... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：40 页

【学位级别】：硕士

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前言
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验细胞
        1.1.2 实验分组
        1.1.3 主要试剂
        1.1.4 试剂盒
        1.1.5 主要耗材及仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 主要试剂的配置
        1.2.2 细胞缺氧/复氧培养
        1.2.3 细胞活力测定
        1.2.4 caspase3免疫荧光和TUNEL双染色
        1.2.5 NF-κB免疫荧光染色
        1.2.6 乳酸脱氢酶（LDH）
        1.2.7 原位检测活性氧（ROS）
        1.2.8 T-SOD和MDA的测量
        1.2.9 Western blotting测定蛋白表达
        1.2.10 数据统计和分析
2 结果
    2.1 球状脂联素减轻缺氧/复氧诱导的新生大鼠心室肌细胞损伤
    2.2 gAd可以抑制缺氧/复氧诱导的程序性坏死和细胞凋亡
    2.3 球状脂联素通过减弱细胞凋亡和程序性坏死来保护缺氧/复氧诱导的细胞损伤
    2.4 球形脂联素在减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和程序性坏死中的合理作用
    2.5 球状脂联素可以通过减少ROS的产生,减少缺氧/复氧诱导的细胞损伤
    2.6 球状脂联素主要通过p38MAPK/NF-κB信号通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和程序性坏死
3 讨论
4 结论
参考文献
综述 脂联素及其受体在心血管疾病中的作用和机制研究进展
    参考文献
致谢
在学期间承担/参与的科研课题与研究成果
    承担/参与的科研课题
    研究成果
个人简历



本文编号：3085977