钠通道β1亚基A197V突变导致Brugada综合征的电生理学研究及患者特异性诱导多能干细胞系的建立

发布时间：2021-03-26 14:30

　　目的：研究钠通道β1亚基新的突变A197V在Brugada综合征发病中的意义。在体外细胞系HEK293水平共转钠通道α亚基SCN5A与突变β1亚基,通过全细胞膜片钳技术明确SCN1B/A197V对钠通道电生理学特性的影响。建立基于患者特异性的诱导多能干细胞（Induced pluripotent stem cells,iPSCs）,为心肌分化、电生理研究及基因治疗提供基础。方法：1.临床明确诊断的10例Brugada综合征患者进行6种编码基因的测序,以发现与该病相关的新的基因位点突变。2.构建基于突变的表达质粒,并通过酶切及直接测序证明质粒构建的成功。3.将含突变基因的质粒转染HEK293细胞,进行细胞免疫荧光鉴定及膜片钳技术检测,以明确该基因突变位点对离子通道特性的影响。4.原代培养患者皮肤成纤维细胞,使用Yamanaka的SKOM（SOX2、KLF4. OCT4、C-MYC）四质粒系统感染皮肤成纤维细胞,在特定的培养条件下诱导生成基于患者特异性的iPSCs。结果:1.基因测序结果表明其中一位具有Ⅰ型Brugada综合征心电图的46岁患者发现编码钠通道β1亚基的SCN1B第4外显子发... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：102 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

酶切验证位点Figure5SiteofPstIdigestion

结果如图B。于是我们选择突变型M1，M3与野生型WT1，WT3进行全质粒测序，测序引物为CMV forward固定引物。测序结果显示突变型Ml野生型WT1,WT3含有正确插入片段，与酶切结果一致。

2重组SCN1B-PIRES2-EGFP质粒测序验证重组野生型及诱变型SCNlB-pIRES2-EGFP经过测序证实含有所要求的SCN1B编码区，其中碱基诱变结果见下图，可见原有碱基C被T代替。


本文编号：3101741