适配蛋白LAT在重型再生障碍性贫血T细胞活化过程中作用机制的研究

发布时间：2021-03-28 20:17

　　目的通过研究重型再生障碍性贫血（Severe Aplastic Anemia, SAA）患者外周血CD3+T淋巴细胞中T细胞活化衔接因子（Linker for activation of T cells, LAT）表达水平、LAT的表达与SAA患者CD8+T细胞功能的关系以及LAT在T细胞中的作用机制,证实LAT与SAA患者T细胞过度增殖及功能亢进之间的因果效应,进一步阐明SAA免疫损伤骨髓造血的机制,为开发SAA靶向治疗提供理论依据。方法研究对象为天津医科大学总医院2012年9月至2013年9月初治SAA患者14例、治疗后缓解的SAA患者12例及正常对照者12例。第一部分研究SAA患者外周血T细胞中LAT的表达水平及其与CD8+T细胞功能的关系,采用流式细胞术检测14例初治SAA患者、12例治疗后缓解的患者及12例正常对照者外周血T细胞LAT及其相关信号分子ZAP-70及pLAT的表达,以及外周血CD8+T细胞中LAT的表达水平及穿孔素（perforin）和颗粒酶B（granzyme B）的表达。采用免疫磁珠分选以上病例外周血CD3+T细胞,实时定量PCR检测分选细胞LAT mRNA... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
縮略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
+T细胞中LAT表达水平的变化">一、重型再生障碍性贫血患者外周血CD3⁺T细胞中LAT表达水平的变化
    1.1 对象和方法
        1.1.1 研究对象
        1.1.2 主要试剂与仪器
        1.1.3 研究方法
+T细胞">            1.1.3.1 免疫磁珠分选CD3⁺T细胞
            1.1.3.2 流式细胞仪检测分选细胞纯度
            1.1.3.3 实时定量PCR
            1.1.3.4 流式细胞仪检测外周血T亚群比例
            1.1.3.5 流式细胞仪检测SAA患者外周血T细胞中LAT及其相关信号分子的表达
+T细胞内穿孔素和颗粒酶B的表达">            1.1.3.6 流式细胞仪检测SAA患者外周血CD8⁺T细胞内穿孔素和颗粒酶B的表达
    1.2 结果
        1.2.1 流式细胞仪检测分选细胞
+T细胞内LATmRNA的表达">        1.2.2 实时定量PCR技术检测SAA患者外周血CD3⁺T细胞内LATmRNA的表达
+T细胞内LAT及其相关信号分子ZAP-70和pLAT的表达">        1.2.3 流式细胞术检测SAA患者外周血CD3⁺T细胞内LAT及其相关信号分子ZAP-70和pLAT的表达
+T细胞比例与CD3⁺T细胞内LAT的表达的相关性">        1.2.4 所有病例外周血CD3⁺T细胞比例与CD3⁺T细胞内LAT的表达的相关性
+T细胞功能与CD8⁺T细胞内LAT的表达的相关性">        1.2.5 所有病例外周血CD8⁺T细胞功能与CD8⁺T细胞内LAT的表达的相关性
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、LAT在重型再生障碍性贫血T细胞中的作用机制
    2.1 对象和方法
        2.1.1 研究对象
        2.1.2 主要试剂与仪器
        2.1.3 研究方法
            2.1.3.1 免疫磁珠分选CD3+T细胞
            2.1.3.2 流式细胞仪检测分选细胞纯度
+T细胞">            2.1.3.3 LAT-siRNA转染SAA患者CD3⁺T细胞
+T细胞">            2.1.3.4 pCMV-myc-LAT质粒转染健康对照CD3⁺T细胞
+T细胞内LAT的表达">            2.1.3.5 流式细胞术检测转染前后CD3⁺T细胞内LAT的表达
+T细胞内穿孔素和颗粒酶B的表达">            2.1.3.6 流式细胞术检测转染前后CD8⁺T细胞内穿孔素和颗粒酶B的表达
            2.1.3.7 Annexin V&PI试剂盒检测K562细胞的凋亡
            2.1.3.8 ELISA法检测培养上清液中IL-4浓度
            2.1.3.9 ELISA法检测培养上清液中IFN-γ浓度
    2.2 结果
        2.2.1 流式细胞仪检测分选细胞
+T细胞及CD8⁺T细胞功能的测定">        2.2.2 LAT敲低组中CD4⁺T细胞及CD8⁺T细胞功能的测定
+T细胞及CD8⁺T细胞功能的测定及K562细胞凋亡的测定">        2.2.3 LAT过表达组中CD4⁺T细胞及CD8⁺T细胞功能的测定及K562细胞凋亡的测定
    2.3 讨论
    2.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
综述
    综述参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]重型再生障碍性贫血患者外周血自然杀伤细胞亚群百分比及功能变化[J]. 李志赏,邵宗鸿,付蓉,王珺,李丽娟,张田,王化泉,吴玉红,阮二宝,宋嘉,瞿文,刘鸿,邢莉民,王晓明,梁勇,关晶,王国锦.  中华医学杂志. 2011 (16)
[2]Fas系统与部分凋亡相关性疾病关系的研究进展[J]. 邢智伟,李云霞.  医学综述. 2010(01)
[3]再生障碍性贫血的研究[J]. 邵宗鸿.  基础医学与临床. 2007(03)
[4]重型再生障碍性贫血患者Th3细胞、调节T细胞数量和转化生长因子β1的水平[J]. 涂梅峰,邵宗鸿,刘鸿,何广胜,付蓉,施均,白洁,曹燕然,王化泉,邢莉民,崔振珠,孙娟,贾海蓉,陈辉树,薛艳萍,杨崇礼.  中华血液学杂志. 2006(11)
[5]重型再生障碍性贫血患者骨髓中辅助性T细胞亚群数量及功能的变化[J]. 何广胜,邵宗鸿,和虹,刘鸿,白洁,施均,曹燕然,涂梅峰,孙娟,贾海蓉,杨崇礼.  中华血液学杂志. 2004(10)
[6]Th1细胞在再生障碍性贫血发病机制中的作用[J]. 和虹,邵宗鸿,何广胜,刘鸿,施均,付蓉,赵明峰,白洁,贾海蓉,孙娟,崔振珠,储榆林,杨天楹,杨崇礼.  中华血液学杂志. 2002(11)
[7]再生障碍性贫血患者骨髓造血干/祖细胞体外增殖分化特征的研究[J]. 陈桂彬,邵宗鸿,贾海蓉,张益枝,郑以州,孙娟,储榆林.  中华血液学杂志. 1999(10)
[8]严重型再生障碍性贫血患者骨髓和外周血 HLA-DR+T 细胞的变化及其淋巴细胞造血抑制活性的研究[J]. 夏长青,储榆林,张君奎,邵宗鸿,田征,陈桂彬,汤晓培.  中华血液学杂志. 1997(04)
[9]重型再生障碍性贫血患者树突细胞刺激异体淋巴细胞增殖的功能[J]. 王珺,邵宗鸿,付蓉,吴玉红,邢莉民,王化泉.  中华内科杂志. 2009 (12)



本文编号：3106179