心肌细胞核内的肌钙蛋白Ⅰ作为非经典转录因子调控ATP2a2/SERCA2a表达的机制研究

发布时间：2021-03-30 14:52

　　第一部分:生理和病理情况下cTnⅠ的核移位现象目的:由TNNI3基因编码的心肌肌钙蛋白I（Cardiac troponin I,cTnⅠ）过去一直被认为是一种胞浆蛋白,但本课题组前期研究和文献报道肌钙蛋白（Troponin I,TnⅠ）可以进入细胞核。此部分实验旨在验证TnⅠ核移位现象的普遍性,及探讨生理和病理情况下核移位比值的改变。方法:1、以c57小鼠为研究对象,通过对其心脏组织的核浆蛋白分离,将心肌组织蛋白分离为核蛋白（Nu）、浆蛋白（Cy）,利用WB检测核蛋白及浆蛋,白内cTnⅠ的表达;2、以11w、14w人胎儿为研究对象,通过对其心脏组织的核浆蛋白分离,将心肌组织蛋白分离为核蛋白、浆蛋白,利用WB检测核蛋白及浆蛋白内TnⅠ的表达;3、以c57小鼠原代心肌细胞为研究对象,通过免疫荧光技术检测cTnⅠ的入核现象及核移位比值;4、以SD大鼠为研究对象,分为左心室和右心室心脏组织,通过提取总蛋白和核浆蛋白分离,利用WB检测总蛋白与核蛋白内cTnⅠ的表达并统计核移位比值;5、以SD大鼠为研究对象,通过主动脉缩窄术（TAC）分为假手术组（Sham组）和以左心衰为主要病理改变的TAC术组,... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

WB检测小鼠心肌细胞浆核内cTnI蛋白的表达

重庆医科大学硕士研究生学位论文2 结果2.1 小鼠及人胚胎心脏组织中 cTnI 的核移位现象通过试剂盒分离的核浆蛋白纯度要求是 WB 检测胞浆蛋白中几乎不含有核内参 Histone H3，核蛋白中几乎不含有浆内参α-Tubulin；cTnI 蛋白在小鼠、胎儿心肌细胞胞浆蛋白和核蛋白中均有所表达，如下图（图 1A-B）；免疫荧光检测小鼠原代心肌细胞内 cTnI 的表达，cTnI 存在核移位，入核比约 30.43±1.073%（图1C-D）。

29图 1D：免疫荧光统计的核内的 cTnI 占比istics of red fluorescence intensity in the cytop理情况下 cTnI 入核比胞内cTnI 入核比较右心室肌细胞显著增C 术后（左心衰）左心室肌细胞内 cTnI（n=3，p=0.0305）（图 2C-D）。


本文编号：3109697