Notch3对低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的作用机制探讨

发布时间：2021-03-30 22:35

　　背景:肺动脉高压（Pulmonary Hypertension,PH）是以肺血管阻力（pulmonary vascular resistance,PVR）进行性升高为主要特征的病理过程,最终导致右心功能进行性衰竭和死亡。持续的肺血管收缩、过度的肺血管重塑、原位血栓的形成和肺血管硬度增大是引起PVR增高、导致肺动脉高压的主要因素。肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs）和内皮细胞的过度增殖是造成血管壁增厚和管腔阻塞、引起小肺动脉和小动脉血管结构重塑,最终导致肺动脉高压的关键因素。部分家族性肺动脉高压和特发性肺动脉高压与骨形成蛋白Ⅱ型受体（BMPR2）基因突变相关,其它多种刺激和因子如低氧等都与该病有关,但大部分肺动脉高压形成的具体分子机制尚不完全明确。Notch基因家族编码一组负责细胞间信号传递的单链跨膜蛋白。研究显示Notch信号在调控PASMC增殖、分化过程中起重要作用。PH患者样本中Notch3的m RNA和蛋白表达明显增高,Notch3-HES5信号通路在人PH和小鼠低氧诱导造成的PH形成中发挥重要作用。Not... 

【文章来源】：首都医科大学北京市

【文章页数】：90 页

【学位级别】：博士

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前言
材料与方法
    1 材料
        1.1 实验细胞
        1.2 试剂和药品
        1.3 主要仪器设备
    2 方法
        2.1 溶液配制
        2.2 细胞培养和细胞实验
        2.3 PCR和Western blot实验
        2.4 钙成像实验
结果
    1 细胞增殖结果
        1.1 MTT法检测低氧对的HPASMCs生长曲线的影响
        1.2 Brdu法检测低氧诱导的HPASMCs增殖能力改变
    2 低氧诱导HPASMCs的Notch3蛋白表达和基因转录变化
        2.1 低氧诱导HPASMCs的Notch3蛋白表达和基因转录变化
        2.2 低氧诱导HPASMCs的HES5蛋白表达变化
    3 敲低Notch3对低氧诱导的HPASMCs增殖的影响
        3.1 不同浓度DAPT对低氧HPASMCs增殖的抑制
        3.2 MTT法检测DAPT对低氧和常氧培养的HPASMCs生长曲线的影响
        3.3 Brdu法检测DAPT对常氧和低氧培养的HPASMCs增殖的影响
        3.4 DAPT抑制低氧诱导的Notch3ICD蛋白表达增高
        3.5 Brdu法检测Notch3-siRNA对低氧诱导HPASMCs增殖的影响
        3.6 Notch3-siRNA在转录水平敲低Notch3在低氧诱导HPASMCs的过表达
        3.7 Notch3-siRNA抑制低氧诱导的Notch3ICD蛋白表达增高
    4 低氧诱导对HPASMCs的细胞钙离子变化的影响
        4.1 低氧对HPASMCs的细胞静息钙、内质网钙和CCE的影响
        4.2 抑制Notch3对低氧诱导的HPASMCs的内质网钙和CCE的影响
    5 抑制Notch3对低氧诱导HPASMCs的mTOR信号通路的影响
        5.1 DAPT对低氧诱导HPASMCs的p-mTOR表达影响
        5.2 DAPT对低氧诱导HPASMCs的p-P70S6K表达影响
        5.3 DAPT对低氧诱导HPASMCs的p-4EBP1表达影响
        5.4 siRNA敲低Notch3对mTOR通路中p-P70S6K蛋白表达影响
讨论
    1 Notch3信号通路与PH
        1.1 Notch信号通路
        1.2 Notch3信号通路与PH
    2 细胞库容性钙释放与PH
    3 mTOR信号通路与PH
        3.1 mTOR信号通路
        3.2 mTOR信号通路与PH
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
附录:攻读学位期间发表论文情况
攻读学位期间参加学术会议交流情况
致谢
个人简历



本文编号：3110275