EPO对高糖环境下乳鼠心肌细胞肥大的影响

发布时间：2021-04-07 05:02

　　目的：应用分子生物学的方法,在细胞水平观察促红细胞生成素（erythropoietinEPO）对高糖环境诱导下体外培养的乳鼠心肌细胞（Cardiomyocytes CM）的影响。方法：1、分离培养新生乳鼠心肌细胞并鉴定：①分离培养新生乳鼠心肌细胞并鉴定：取新生乳鼠心室肌组织后,以0.1%胰蛋白酶及0.5g/LⅡ型胶原蛋白酶复合消化分离心肌细胞,差速贴壁45min分离纯化心肌细胞,加入100μmol/L Brdu抑制非心肌细胞的生长以提高心肌细胞纯度。②观察培养心肌细胞的活性：电子显微镜下观察细胞,可见细胞规律搏动即心肌细胞活性好。③进行细胞鉴定：心肌细胞爬片用明胶或层粘连蛋白包被的细胞爬片进行,细胞爬片后用免疫组化SABC法进行鉴定,免疫组化结果应为:a-actin阳性,证实为心肌细胞（CM）。2、取分离培养的心肌细胞随机分为：①对照组：5.5mmol/L葡萄糖；②高糖组：25mmol/L葡萄糖；③EPO+高糖组：20u/mlEPO+25mmol/L葡萄糖,72h后行下一步实验。3、心肌细胞肥大的检测：软件计算心肌细胞表面积,浓度。4、[3H]-亮氨酸渗入测,5、心肌细胞β-MHC m... 

【文章来源】：昆明医科大学云南省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

心肌细胞3H-leu渗入量


本文编号：3122851