BCR-ABL1阳性微泡的生物学功能和临床检测意义

发布时间：2021-04-17 21:02

　　第一部分BCR-ABL1阳性微泡的生物学特征及内容物分析目的：微泡（MV）是一种新型的细胞间信息交流载体,具有丰富的生物学功能；MV的生物学功能由其携带的内容物决定,不同应激条件下MV的内容物存在较大差异,是细胞的一种适应性机制。本部分研究拟以K562细胞为代表,了解慢性髓性白血病（CML）来源MV的生物学特性以及主要包含的内容物,明确其功能指向；同时探讨应激状态下K562细胞及其MV中miRNA表达谱等内容物的改变。方法：体外培养K562细胞,采用梯度离心法收集MV；离心获得的沉淀物以透射电镜观察,流式细胞仪分析其大小和表面标志,同时采用PKH-26及CFSE等荧光染料染色沉淀物后于激光共聚焦和荧光显微镜下观察；经鉴定是MV后提取其中的RNA,实时定量PCR检测其中的BCR-ABL1表达,荧光原位杂交（FISH）检测其中的染色体片段；在此基础上,采用低血清培养刺激K562细胞并收集其来源的MV,以正常培养的K562细胞及其MV作为对照,芯片检测四个样本中的miRNA表达谱；对比分析不同状态下MV中miRNA表达谱的差异,生物信息学分析差异niRNA分子可能参与的生物学行为。最后,构建... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

小歲手术过程

图2.流式细胞仪检测K562-MV.流式细胞仪以l.Oum微球设门，发现所检测的MV大小均在1.0师以下，其中300nm、500nm和800nm是主要大小分布区，每个分布区的MV均携带有Annexin V分子的表达。2.饥饿应激对K562细胞及其MV中miRNA表达谱的影响前期提取并送检的RNA经质控后均合格，提示从MV能够有效获取足量mRNA及miRNA供芯片检测(图3)。根据信号检测到的所有位点的荧光强度，去除和背景信号无显著性差异的探针点后选取有效数据。通过对比实验组和对照组之间相同有效位点的信号强度比值即倍数差异（foldchange, FC,取FC>=2和FC<=0.5为有统计学意义），我们共在K562细胞和MV中均检出了 977种miRNA的前体分子，四个样本间具有显著性差异的miRNA数见表1。[ru] 叫_|40_ ‘丨 30-30-20- ,20-10-0- ?一'、 .丄一上sT- 0 ‘ Y'"卞 I I I I I I"“‘ I I I I ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ J ： [“"“^ ‘“20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 [s] 20 25 30 35 -10 45 50 55 60 65 (sj

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本文编号：3144136