重型甲型血友病患者F8基因突变筛查鉴定及功能分析

发布时间：2021-04-20 15:38

　　目的:甲型血友病,即血友病A,是凝血因子Ⅷ缺乏或功能缺陷所导致的X连锁隐性出血性疾病,主要累及男性,在男性人群的发病率约为1/5000。患者主要表现为反复自发性或外伤后出血。其中,重型甲型血友病患者临床出血严重,凝血因子Ⅷ凝血活性（FⅧ:C）<1%,FⅧ制剂替代治疗费用高。因此,开展重型甲型血友病患者基因诊断具有重要意义。F8基因是目前公认的甲型血友病致病基因,人类基因突变数据库已经报道了3000多种F8基因突变,遗传异质性高,无突变热点,突变类型包括无义突变、错义突变、剪接突变、插入、缺失、倒位等。其中,内含子22倒位和内含子1倒位是发生率较高的可重复性突变,也是重型甲型血友病的主要发病分子机制。本研究拟对35例重型甲型血友病患者进行F8基因倒位检测、突变筛查及功能分析,为进一步丰富F8基因突变数据库、揭示重型甲型血友病分子机制提供理论依据。研究方法:以35例重型甲型血友病患者为研究对象,通过长距离聚合酶链反应（LD-PCR）和双管多重PCR检测F8基因内含子22和内含子1倒位。倒位阴性患者通过PCR结合DNA测序开展F8基因突变筛查。新的c.670+1G>A剪接突变功能... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
    2.2 研究对象
    2.3 基因组DNA提取
    2.4 F8基因内含子22倒位检测
        2.4.1 引物
        2.4.2 长距离聚合酶链反应（LD-PCR）
    2.5 F8基因内含子1倒位检测
        2.5.1 引物
        2.5.2 双管多重PCR
    2.6 F8基因突变筛查
        2.6.1 引物
        2.6.2 PCR
        2.6.3 DNA测序及序列分析
        2.6.4 生物信息学分析
A剪接突变功能分析">    2.7 c.670+1G>A剪接突变功能分析
        2.7.1 野生型和突变型F8 minigene表达载体构建
        2.7.2 基因转染
        2.7.3 RNA提取
        2.7.4 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）
3 结果
    3.1 F8基因内含子22倒位检测结果
    3.2 F8基因内含子1倒位检测结果
    3.3 F8基因突变筛查结果
A剪接突变功能分析结果">    3.4 c.670+1G>A剪接突变功能分析结果
4 讨论
5 结论
附录
本论文创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3149952