白介素-35在LPS诱导的内皮功能障碍中的保护作用

发布时间：2021-04-21 01:59

　　目的:探讨白介素（Interleukin,IL）-35对脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导的内皮功能障碍（Endothelial dysfunction,ED）中的作用及其机制。方法:细胞部分:1、将状态良好的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,传代后培养24h,分为5组,分别为空白对照组、LPS组、LPS+IL-35（1ng/ml）组、LPS+IL-35（10ng/ml）组、LPS+IL-35（100ng/ml）组,加用LPS处理24h后,再予三种不同浓度的人重组蛋白IL-35处理12h,DMEM培养基作为对照。2、流式细胞学分析细胞凋亡水平收集经过不同处理后的HUVECs,将细胞密度调节至105-106个细胞/ml,离心弃上清液,加入5ul的7-AAD处理15min,上机前5min再加入5ul的PI,最后,使用流式细胞学技术检测各组细胞凋亡水平。3、人炎症因子蛋白芯片分析各组细胞中炎症因子水平的变化。4、RT-q PCR检测细胞间黏附分子（Intercellular cell adh... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料与试剂
        2.1.1 实验细胞株
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 饲料
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 主要仪器设备
        2.1.6 试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 HUVECs的培养与传代
        2.2.2 构建LPS致内皮功能障碍模型
        2.2.3 IL-35 处理HUVECs
        2.2.4 小鼠动物实验
        2.2.5 标本采集与处理
    2.3 检测指标
        2.3.1 流式细胞仪检测细胞凋亡
        2.3.2 蛋白芯片
        2.3.3 RT-PCR
        2.3.4 Western Blot
        2.3.5 Elisa操作流程
        2.3.6 免疫组化染色
    2.4 数据处理
第3章 结果
    3.1 不同浓度IL-35对HUVECs的影响
    3.2 人炎症因子蛋白芯片分析HUVECs中炎症因子的表达
    3.3 IL-35在LPS诱导的内皮功能障碍中的保护作用
        3.3.1 RT-qPCR检测VCAM-1、ICAM-1、IL-6和IL-8mRNA的水平
        3.3.2 WB检测VCAM-1、ICAM-1、IL-6和IL-8 蛋白表达水平
    3.4 过表达IL-35 改善内皮功能障碍
        3.4.1 小鼠体内IL-35 的表达情况
        3.4.2 IL-35 减轻炎症反应
        3.4.3 过表达IL-35 降低血管内皮黏附分子
    3.5 IL-35 改善内皮功能障碍的机制
        3.5.1 IL-35 促进STAT1和STAT4 的磷酸化
        3.5.2 IL-35 促进STAT1和STAT4 之间的相互作用
        3.5.3 Fludarabine抑制可逆转IL-35 对内皮功能障碍的保护作用
        3.5.4 siRNA的转染效率及其干扰效果
        3.5.5 干扰STAT4 的表达可逆转IL-35 对内皮功能障碍的保护作用
第4章 讨论
    4.1 白介素-35
    4.2 IL-35 在内皮功能障碍中的作用
    4.3 在体内实验中内皮黏附分子以及炎症指标的变化
    4.4 IL-35 通过活化STAT1和STAT4 信号传导改善内皮功能障碍
    4.5 IL-35 的应用前景
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 本研究的不足及进一步设想
        5.2.1 研究中的不足
        5.2.2 进一步设想
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3150829